BY-1363 CHO-JJ-9中国仓鼠卵巢细胞系
- 公司名称 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号 BY-1363
- 产地
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/29 13:47:52
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来源与筛选:该细胞系以 CHO-K1 为亲本,通过亚硝ji胍化学诱变结合表观遗传表型筛选获得。经多轮单克隆纯化,挑选出第 9 株组蛋白修饰谱改变zui显著的克?。ā癑J-9” 标识诱变批次与克隆编号)。筛选过程未引入基因编辑,仅通过检测组蛋白修饰整体水平(如乙酰化、甲基化总含量)确定阳性克隆,全基因组测序显示与亲本相似度>99.5%,确保遗传背景的稳定性。
形态与增殖:体外培养呈上皮样形态,贴壁生长时细胞铺展均匀,较野生型 CHO 稍大且边界清晰;因染色质功能异常,悬浮培养易聚集成团(直径 50-100μm),故主要以贴壁方式培养。37℃、5% CO?条件下,增殖周期约 36-42 小时,较野生型延长 6-8 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,传代 60 次以上组蛋白修饰异常表型稳定(整体波动<8%),冻存复苏后存活率超 84%。
功能特征:核心优势在于组蛋白修饰的广泛性改变:整体组蛋白乙酰化水平较野生型升高 25%,甲基化水平降低 18%,导致全基因组染色质开放度显著变化(ATAC-seq 显示 18% 的基因组区域可及性改变),其中增强子区域开放度差异最tu出(上调区域占 12%,下调区域占 15%)。ChIP-seq 验证显示,多个组蛋白修饰(如 H3K4me3、H3K27ac)的分布模式改变,使涉及细胞代谢、应激响应的 843 个基因表达量出现 2-5 倍差异,模拟了复杂表观遗传扰动下的基因调控表型。
泛表观遗传调控机制研究
染色质整体动态分析
广谱表观遗传药物筛选
贴壁培养操作:
复苏:从液氮取出冻存管,37℃水浴 1-2 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 培养瓶,37℃、5% CO?培养箱静置培养。
换液:接种 24 小时后首ci换液,去除未贴壁细胞,此后每 48 小时换液一次,维持细胞融合度<70% 以保证表观遗传状态稳定。
传代:当细胞融合度达 60%-70% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 细胞解离液,37℃孵育 3-4 分钟,镜检细胞脱落后加入 8mL 培养基终止解离,按 1:4 比例传代,避免过度密集导致修饰表型漂移。
组蛋白修饰检测:
蛋白提?。喝?5×10?个细胞,用组蛋白提取试剂盒分离纯化组蛋白,BCA 法定量后调整浓度至 1μg/μL。
修饰分析:通过 Western blot 检测总组蛋白乙?;?、甲基化水平(选用泛特异性抗体),或采用质谱分析定量多种修饰类型,建议每 15 代检测一次以验证表型稳定性。
冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,用冻存液(70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 5×10?个 /mL,分装至冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜,次日转移至液氮保存,保存期可达 5 年以上,复苏后需传代 2-3 次再进行表观遗传相关实验(确保修饰状态稳定)。
优势:组蛋白修饰改变范围广,可模拟复杂表观遗传扰动;表型稳定,传代 60 次整体修饰水平波动<8%;无外源基因整合,保留天然表观遗传互作网络;适合多靶点药物筛选,检测效率较单一修饰模型提升 40%。
局限性:修饰改变的复杂性使单一调控机制解析难度增加(需结合单修饰模型验证);贴壁依赖性强,悬浮培养会导致修饰谱改变(约 12%);部分实验需配套多组学数据分析,技术门槛较高。
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