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BY-1363 CHO-JJ-9中国仓鼠卵巢细胞系

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CHO-JJ-9中国仓鼠卵巢细胞系
CHO-JJ-9中国仓鼠卵巢细胞系是经化学诱变筛选获得的表观遗传研究模型,因组蛋白修饰调控网络广泛改变、染色质动态平衡失调,成为研究泛组蛋白修饰介导的表观遗传调控、染色质功能及相关药物筛选的特色工具。其保留 CHO 细胞典型的上皮样形态与贴壁生长特性,同时因组蛋白整体调控异常,为解析多种组蛋白修饰协同作用机制提供了综合性实验平台。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与筛选:该细胞系以 CHO-K1 为亲本,通过亚硝ji胍化学诱变结合表观遗传表型筛选获得。经多轮单克隆纯化,挑选出第 9 株组蛋白修饰谱改变zui显著的克?。ā癑J-9” 标识诱变批次与克隆编号)。筛选过程未引入基因编辑,仅通过检测组蛋白修饰整体水平(如乙酰化、甲基化总含量)确定阳性克隆,全基因组测序显示与亲本相似度>99.5%,确保遗传背景的稳定性。

  • 形态与增殖:体外培养呈上皮样形态,贴壁生长时细胞铺展均匀,较野生型 CHO 稍大且边界清晰;因染色质功能异常,悬浮培养易聚集成团(直径 50-100μm),故主要以贴壁方式培养。37℃、5% CO?条件下,增殖周期约 36-42 小时,较野生型延长 6-8 小时,适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,传代 60 次以上组蛋白修饰异常表型稳定(整体波动<8%),冻存复苏后存活率超 84%。

  • 功能特征:核心优势在于组蛋白修饰的广泛性改变:整体组蛋白乙酰化水平较野生型升高 25%,甲基化水平降低 18%,导致全基因组染色质开放度显著变化(ATAC-seq 显示 18% 的基因组区域可及性改变),其中增强子区域开放度差异最tu出(上调区域占 12%,下调区域占 15%)。ChIP-seq 验证显示,多个组蛋白修饰(如 H3K4me3、H3K27ac)的分布模式改变,使涉及细胞代谢、应激响应的 843 个基因表达量出现 2-5 倍差异,模拟了复杂表观遗传扰动下的基因调控表型。

二、核心应用领域
  1. 泛表观遗传调控机制研究

该细胞系是解析多种组蛋白修饰协同作用的理想模型。通过多组学联合分析(转录组 + 蛋白质组 + 修饰组),鉴定出 126 个受组蛋白修饰网络调控的核心基因,其中 62% 的基因启动子区同时存在 3 种以上组蛋白修饰的共定位变化,证实组蛋白修饰间的交叉调控效应。在细胞应激实验中,其热休克蛋白 HSP70 的诱导表达量较野生型降低 40%,伴随 H3K9ac 在 HSP70 启动子区的富集减少,揭示组蛋白修饰网络对环境响应基因的调控机制。
  1. 染色质整体动态分析

因染色质结构广泛改变,该细胞系可用于研究染色质全局构象与细胞功能的关联。染色体构象捕获(Hi-C)实验显示,其 A/B compartments 转换频率较野生型增加 22%,拓扑相关结构域(TAD)边界强度降低 15%,表明组蛋白修饰异常影响高阶染色质结构;在 DNA 复制时序分析中,晚期复制区比例增加 18%,证实染色质动态对基因组复制程序的调控作用,为理解染色质组织的整体性提供新视角。
  1. 广谱表观遗传药物筛选

在药物研发中,该细胞系可用于筛选调节整体组蛋白修饰的化合物。通过建立基于荧光共振能量转移(FRET)的高通量检测体系,同时监测多种组蛋白修饰酶的活性变化,筛选准确率达 87%。例如,在抗肿瘤药物筛选中,其能同时识别影响组蛋白乙酰转移酶与去甲基化酶的多靶点化合物,使候选药物的作用谱分析效率提升 40%,为多靶点表观遗传药物开发提供du特模型。
三、培养方法
  • 贴壁培养操作

  1. 复苏:从液氮取出冻存管,37℃水浴 1-2 分钟解冻,转移至含 10mL 预热培养基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的离心管,1000rpm 离心 5 分钟,重悬后接种至 T75 培养瓶,37℃、5% CO?培养箱静置培养。

  1. 换液:接种 24 小时后首ci换液,去除未贴壁细胞,此后每 48 小时换液一次,维持细胞融合度<70% 以保证表观遗传状态稳定。

  1. 传代:当细胞融合度达 60%-70% 时,弃培养基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 细胞解离液,37℃孵育 3-4 分钟,镜检细胞脱落后加入 8mL 培养基终止解离,按 1:4 比例传代,避免过度密集导致修饰表型漂移。

  • 组蛋白修饰检测

  1. 蛋白提?。喝?5×10?个细胞,用组蛋白提取试剂盒分离纯化组蛋白,BCA 法定量后调整浓度至 1μg/μL。

  1. 修饰分析:通过 Western blot 检测总组蛋白乙?;?、甲基化水平(选用泛特异性抗体),或采用质谱分析定量多种修饰类型,建议每 15 代检测一次以验证表型稳定性。

  • 冻存流程:取对数生长期细胞,1000rpm 离心 5 分钟,用冻存液(70% wan全培养基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重悬至 5×10?个 /mL,分装至冻存管,程序降温盒 - 80℃过夜,次日转移至液氮保存,保存期可达 5 年以上,复苏后需传代 2-3 次再进行表观遗传相关实验(确保修饰状态稳定)。

四、优势与局限性
  • 优势:组蛋白修饰改变范围广,可模拟复杂表观遗传扰动;表型稳定,传代 60 次整体修饰水平波动<8%;无外源基因整合,保留天然表观遗传互作网络;适合多靶点药物筛选,检测效率较单一修饰模型提升 40%。

  • 局限性:修饰改变的复杂性使单一调控机制解析难度增加(需结合单修饰模型验证);贴壁依赖性强,悬浮培养会导致修饰谱改变(约 12%);部分实验需配套多组学数据分析,技术门槛较高。

五、研究意义
CHO-JJ-9 细胞系的建立为泛表观遗传研究提供了综合性模型,其组蛋白修饰网络异常的特性推动了对表观遗传调控整体性的理解。在基础研究中,其助力阐明多种组蛋白修饰的协同作用及对染色质高级结构的影响,为解析 “表观遗传网络” 提供关键实验依据;在应用领域,其作为复杂表观遗传扰动的细胞替身,加速了多靶点表观遗传药物的研发进程,同时为疾病相关表观遗传标志物的筛选提供了理想材料,是连接基础表观遗传学与复杂疾病研究的重要桥梁。

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