如何選擇合適的蛋白質(zhì)定量技術(shù)：iTRAQ vs SILAC檢測技術(shù)服務詳情介紹

在dànbáizhì組學研究中，準確的dànbáizhì定量技術(shù)是揭示生物過程變化的核心。iTRAQ和SILAC作為兩種廣泛應用的dànbáizhì定量方法，各自具備dútè優(yōu)勢與局限。理解兩者的技術(shù)原理、適用場景與關(guān)鍵差異，對于制定高效可靠的實驗方案至關(guān)重要。

一、iTRAQ與SILAC的基本原理解析

1、iTRAQ技術(shù)簡介

iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）是基于同位素標記的定量策略，通過在dànbáizhì酶解后的肽段上進行化學標記，使不同樣本中的同一肽段在質(zhì)譜中產(chǎn)生不同質(zhì)量的報告離子。通過測量報告離子強度，可以推算出各樣本中dànbáizhì的相對豐度。iTRAQ支持4-plex、8-plex甚至16-plex標記，適合多樣本同時分析。

2、SILAC技術(shù)簡介

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）則是一種代謝性標記技術(shù)，通過向細胞培養(yǎng)基中添加含穩(wěn)定同位素的必需氨基酸，使細胞在生長過程中將標記氨基酸自然整合到dànbáizhì中。輕重肽段在質(zhì)譜檢測時表現(xiàn)出可區(qū)分的質(zhì)量差異，實現(xiàn)樣本間的相對定量。SILAC標記效率高、實驗流程簡潔，特別適用于動態(tài)變化分析。

二、iTRAQ與SILAC的應用特性比較

1、樣本類型適用性

• iTRAQ適用于各種類型的dànbáizhì樣本，包括細胞、組織、血漿、血清及臨床樣本。由于標記在肽段水平進行，不依賴于細胞培養(yǎng)，可靈活應用于各種生物材料。

• SILAC則主要用于可以體外培養(yǎng)的細胞系，例如HeLa、293T等人源細胞。對于不可培養(yǎng)或難以標記的樣本，如組織切片或血液樣本，SILAC不適用。

2、定量精度與信號一致性

• iTRAQ在復雜樣本中可能出現(xiàn)比值壓縮（Ratio Compression）現(xiàn)象，即低豐度信號被背景噪聲稀釋，導致實際差異低估。但借助高分辨質(zhì)譜儀器與優(yōu)化分離技術(shù)，可以有效減輕這一影響。

• SILAC因標記在細胞生長階段完成，避免了酶解或后處理過程中的人為偏差，定量結(jié)果高度準確，適合追蹤微小的表達變化。

3、實驗通量與數(shù)據(jù)規(guī)模

• iTRAQ支持高通量分析，一次性處理4-16個樣本，大幅提高了數(shù)據(jù)生成速度，適合多組別、多變量的大規(guī)模項目，如藥物篩選、時間序列分析。

• SILAC通常處理2-3個條件組（輕、中、重標簽），適合處理簡單的實驗設(shè)計，例如藥物處理前后或敲除/過表達實驗，但在處理復雜實驗時存在一定限制。

三、選擇dànbáizhì定量技術(shù)的關(guān)鍵考量因素

1、研究目標與實驗設(shè)計

• 若需要比較多個實驗組，如多劑量梯度、多時間點采樣或多臨床樣本分析，iTRAQ憑借高通量能力更能勝任。

• 若研究關(guān)注動態(tài)生物過程，如細胞信號通路響應、dànbáizhì翻譯后修飾變化等，且樣本為可培養(yǎng)細胞，SILAC以其高準確性和低變異性更具優(yōu)勢。

2、樣本來源與制備條件

• 當實驗材料為血清、血漿、組織或固定樣本，可以選擇iTRAQ。iTRAQ不依賴細胞代謝活性，因此能覆蓋更廣泛的樣本類型。

• 對于體外培養(yǎng)且能耐受同位素標記培養(yǎng)基的細胞系，SILAC可以實現(xiàn)近乎無偏差的內(nèi)源標記，適合高精度需求的基礎(chǔ)研究。

3、數(shù)據(jù)分析需求與技術(shù)挑戰(zhàn)

• iTRAQ實驗數(shù)據(jù)較大，且由于比值壓縮效應，數(shù)據(jù)分析需要使用高效、專門的軟件工具（如Proteome Discoverer），并結(jié)合正交驗證方法增加可信度。

• SILAC數(shù)據(jù)相對簡潔，輕重肽段對應，便于初步分析和定量，但當涉及多重修飾或多狀態(tài)比較時，數(shù)據(jù)處理也需zhuānyè軟件支持，如MaxQuant。

iTRAQ與SILAC作為dànbáizhì定量的兩大主流技術(shù)，各自在不同研究需求中展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢。合理評估實驗樣本、研究目標、預算及實驗條件，科學選擇適合的定量方法，將直接決定項目的效率與數(shù)據(jù)質(zhì)量。在追求jīngzhǔn科學探索的道路上，百泰派克生物科技致力于為科研人員提供zhuānyè、高效、可信賴的定量蛋白組分析服務，與您攜手推進生命科學的邊界。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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