当前位置:北京百泰派克生物科技有限公司>>检测技术服务>>蛋白分析>> Edman降解是什么?蛋白质测序的核心技
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dànbáizhì是生命活动的执行者,其一级结构(氨基酸序列)决定了其功能。要研究dànbáizhì的结构与功能,首先必须了解其氨基酸组成和排列顺序。因此,dànbáizhì测序成为现代生命科学研究和生物医药开发中的关键步骤。而在众多测序方法中,Edman降解(Edman degradation)被誉为dànbáizhì一级结构解析的“经典之选"。
一、什么是Edman降解?
Edman降解是一种用于确定dànbáizhìN端氨基酸序列的化学方法,由澳大利亚化学家Pehr Edman于1950年开发。其核心原理是:通过苯异硫氰酸酯(PITC)选择性标记肽链的N端氨基酸,在温和条件下裂解形成可识别的PTH-氨基酸衍生物,同时保留剩余肽链用于下一轮循环。这种逐步“剥离"氨基酸的方式,可以顺序解析出dànbáizhìN端的氨基酸组成。
二、Edman降解的反应流程:
1、标记:PITC与肽链N端游离氨基反应,形成环状酰胺中间体。
2、裂解:在酸性条件下切断N端dìyī个氨基酸,与PITC形成稳定的PTH-氨基酸。
3、鉴定:使用高效液相色谱(HPLC)或其他方法检测PTH-氨基酸种类。
4、重复循环:重复以上步骤,逐个剥离氨基酸,直到达到测序上限(一般为30个残基以内)。
三、Edman降解的优势与局限
? 优势:
高保真度:逐个氨基酸识别,序列准确性高。
无需标签:不需要对目标蛋白进行同位素或荧光标记。
对已纯化蛋白有效:适用于单一dànbáizhì样本的序列验证。
? 局限性:
N端封闭限制:若蛋白N端被修饰(如乙酰化、甲酰化),将无法进行Edman反应。
不适合复杂混合物:只能对单一、多肽纯度较高的样本有效。
序列长度有限:一般测序上限为20–30个氨基酸残基,无法覆盖全长蛋白。
对蛋白量有要求:通常需要≥1 pmol级别的纯蛋白输入量。
四、Edman降解在科研中的应用
尽管现代质谱(MS)技术逐渐成为主流,Edman降解依然在以下领域具有dútè价值:
1、dànbáizhìN端验证
在重组蛋白表达与纯化后,研究人员常使用Edman降解确认目标蛋白是否有N端截断、修饰,或起始密码子翻译是否正确。
2、抗体表位测序
Edman法适用于对单一多肽(如抗原肽、B细胞表位)进行序列确认,特别是在开发多克隆或单克隆抗体时。
3、结合质谱进行双重验证
在某些关键项目中,如临床级蛋白药物开发、蛋白工程研究,研究者会同时使用Edman降解和LC-MS/MS对序列进行交叉确认,确保结果无误。
五、Edman降解 vs 质谱测序:互为补充
? 实践经验显示,在Nduāncèxù、药物质量控制、定量标准品开发等领域,两者联用效果zuì佳。
Edman降解作为dànbáizhì测序的奠基性技术,其高精度与可解释性在某些应用中依然wúkětìdài。百泰派克生物科技坚持以科研需求为导向,致力于为高??翁庾椤⒖蒲谢辜吧镆揭┭蟹⑼哦犹峁└弑曜?、可信赖的蛋白测序解决方案与技术支持。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对dànbáizhì序列进行分析,提供基于质谱的蛋白测序分析服务,包括对dànbáizhì的氨基酸组成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服务。对于未知理论序列的dànbáizhì,提供基于从头测序法的dànbáizhì从头测序服务,对蛋白序列进行分析。
※服务优势:
1.采用目前世界上优良的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;
3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;
4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;
5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug,即可完成检测;
6.测序不受N端封闭,PEC和和糖基化等N端修饰的影响。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,提供定量dànbáizhì组学、靶向dànbáizhì组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种dànbáizhì组学分析服务。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì组学服务,助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。
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5.zhuānyè生物信息学分析,分析更系统准确。
百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析,采用金属元素标记物(通常是金属元素标记的特异抗体)标记细胞表面和内部的分子,然后用流式细胞原理分离单个细胞,再用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析单个细胞的原子质量谱,zuì后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。
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采用金属标记抗体技术,避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题??稍诘ハ赴忝嫔隙远嘀种副晖苯斜碚?,百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。
2.分析数量大,成本较低
单细胞RNAseq受成本等因素限制,所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右,而流式质谱技术一次(单样本)就可分析至少10^5的细胞,实现了数量级的提高,且成本不高于单细胞RNAseq。
3.应用前景大
①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化,在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景;
②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外,质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰;
③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
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北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等zhuānyè服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则,通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证,建立了完备的质量体系,数据冷热/异地备份,设备定期计量/期间核查,软件审计追踪,为客户提供一体化解决方案和技术服务,支持新药研发、药物申报注册和生产放行。
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