不同蛋白質(zhì)定量方法的優(yōu)勢(shì)與局限性分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì定量是生命科學(xué)研究中的關(guān)鍵步驟，直接關(guān)系到生物學(xué)現(xiàn)象的揭示和疾病機(jī)制的理解。隨著質(zhì)譜技術(shù)和樣品處理流程的不斷發(fā)展，不同的dànbáizhì定量方法應(yīng)運(yùn)而生。

一、標(biāo)記定量方法（Labeling-based Quantification）

標(biāo)記定量方法通過(guò)在樣品處理過(guò)程中引入同位素或異位素標(biāo)簽，實(shí)現(xiàn)多樣品間的相對(duì)定量或juéduì定量，代表性技術(shù)包括SILAC、iTRAQ和TMT。

1、SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture）

??優(yōu)勢(shì)

SILAC通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)階段引入穩(wěn)定同位素標(biāo)記，使得不同樣本來(lái)源的dànbáizhì在質(zhì)譜檢測(cè)中可以直接區(qū)分。由于標(biāo)記發(fā)生在活細(xì)胞水平，zuì大程度避免了樣品處理引入的偏差，數(shù)據(jù)重復(fù)性jíhǎo，特別適合細(xì)胞模型中的動(dòng)態(tài)變化研究。

??局限性

SILAC主要適用于能夠體外培養(yǎng)的細(xì)胞系，對(duì)組織樣本或臨床樣品則難以應(yīng)用。同時(shí)，標(biāo)記氨基酸的成本較高，且對(duì)實(shí)驗(yàn)條件（如培養(yǎng)基成分）要求嚴(yán)格，限制了普適性。

2、iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification）

??優(yōu)勢(shì)

iTRAQ技術(shù)可實(shí)現(xiàn)zuì多8到16個(gè)樣品的同時(shí)分析，極大提高了實(shí)驗(yàn)通量和樣本對(duì)比的廣度。標(biāo)記在肽段水平完成，不依賴(lài)生物體系來(lái)源，適用于組織、細(xì)胞、血清等多種樣本類(lèi)型。

??局限性

iTRAQ存在"比值壓縮"現(xiàn)象（ratio compression），即高豐度肽段的共洗脫導(dǎo)致定量jīngquè度下降。此外，標(biāo)記成本高昂，對(duì)儀器性能要求較高（如高分辨質(zhì)譜儀），對(duì)初學(xué)者友好度有限。

3、TMT（Tandem Mass Tags）

??優(yōu)勢(shì)

TMT作為一種異位素標(biāo)記方法，與iTRAQ類(lèi)似，但在信號(hào)檢測(cè)靈敏度和數(shù)據(jù)一致性方面有所優(yōu)化。新一代TMTpro可支持16重標(biāo)記，適合大規(guī)模樣本隊(duì)列研究，如癌癥隊(duì)列樣本或多時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)追蹤。

??局限性

TMT同樣受限于比值壓縮問(wèn)題，且數(shù)據(jù)解析需依賴(lài)特定軟件工具。此外，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需格外注意樣品平衡，以避免因通道效應(yīng)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。

二、無(wú)標(biāo)記定量方法（Label-free Quantification）

無(wú)標(biāo)記定量依靠質(zhì)譜信號(hào)的強(qiáng)度（MS1）或譜圖計(jì)數(shù)（Spectral Counting）實(shí)現(xiàn)樣本間dànbáizhì豐度的比較，無(wú)需額外的化學(xué)修飾步驟。

1、基于峰面積的定量（Intensity-based Quantification）

??優(yōu)勢(shì)

峰面積定量方法依賴(lài)質(zhì)譜圖中肽段離子信號(hào)的積分，理論上靈敏度高，動(dòng)態(tài)范圍廣，可jīngzhǔn捕捉低豐度蛋白的變化。適用于大規(guī)模、多批次樣本的長(zhǎng)期追蹤研究。

??局限性

該方法對(duì)儀器穩(wěn)定性和樣品前處理一致性要求jígāo。不同批次間的系統(tǒng)誤差容易引入定量偏差，通常需要使用嚴(yán)格的QC樣品進(jìn)行批間矯正。

2、譜圖計(jì)數(shù)法（Spectral Counting）

??優(yōu)勢(shì)

譜圖計(jì)數(shù)通過(guò)統(tǒng)計(jì)特定dànbáizhì對(duì)應(yīng)的碎片譜數(shù)量推測(cè)其相對(duì)豐度，方法簡(jiǎn)單直觀，不需要復(fù)雜的數(shù)據(jù)歸一化處理，適合粗篩選階段的大規(guī)模比較。

??局限性

譜圖計(jì)數(shù)靈敏度有限，尤其對(duì)低豐度蛋白不夠敏感，且定量準(zhǔn)確性受限于肽段識(shí)別的重復(fù)性，通常需要結(jié)合其他定量策略加以驗(yàn)證。

三、juéduì定量方法（Absolute Quantification）

juéduì定量方法旨在jīngquè測(cè)量目標(biāo)dànbáizhì的juéduì拷貝數(shù)或濃度，常用于臨床生物標(biāo)志物驗(yàn)證或藥物靶點(diǎn)量化。

1、AQUA（Absolute Quantification）

??優(yōu)勢(shì)

AQUA利用含穩(wěn)定同位素標(biāo)記的合成肽作為內(nèi)標(biāo)，直接與目標(biāo)肽段進(jìn)行一對(duì)一比較，定量精度jígāo，可達(dá)亞皮摩爾（sub-pM）級(jí)別。特別適合需要高精度定量的生物標(biāo)志物研究。

??局限性

AQUA需針對(duì)每一個(gè)待測(cè)蛋白合成特定內(nèi)標(biāo)肽段，前期設(shè)計(jì)和合成成本高昂，且實(shí)驗(yàn)流程較為復(fù)雜，對(duì)操作技術(shù)要求jígāo，不適合高通量初篩。

2、PSAQ（Protein Standard Absolute Quantification）

??優(yōu)勢(shì)

PSAQ方法使用完整dànbáizhì作為內(nèi)標(biāo)，更好地模擬樣本中天然蛋白的消化效率，提高了整體定量的準(zhǔn)確性，廣泛應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)如血漿、組織中的蛋白juéduì定量。

??局限性

PSAQ需要重組表達(dá)并純化完整dànbáizhì作為標(biāo)準(zhǔn)品，制備過(guò)程復(fù)雜且成本高，同時(shí)對(duì)于多目標(biāo)蛋白的定量任務(wù)，實(shí)驗(yàn)規(guī)模和成本都會(huì)成倍增加。

四、選擇不同dànbáizhì定量方法的策略考量

選擇合適的dànbáizhì定量方法需綜合考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、樣本類(lèi)型、定量精度需求、預(yù)算成本以及實(shí)驗(yàn)周期。

• 實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：探索性研究更傾向選擇無(wú)標(biāo)記定量；驗(yàn)證性研究則推薦標(biāo)記定量或juéduì定量。

• 樣本類(lèi)型：細(xì)胞樣品適合SILAC，組織樣本則更適合TMT或無(wú)標(biāo)記定量。

• 預(yù)算與設(shè)備條件：標(biāo)記定量成本高但精度好，適合有g(shù)āoduān質(zhì)譜儀支撐的實(shí)驗(yàn)室；資源受限條件下，可考慮優(yōu)化無(wú)標(biāo)記定量流程。

隨著質(zhì)譜靈敏度和分辨率的持續(xù)提升，dànbáizhì定量方法正在向更高通量、更高精度、更強(qiáng)適應(yīng)性的方向演進(jìn)。不同dànbáizhì定量方法都具有其優(yōu)勢(shì)和局限性，科研人員需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求合理選擇技術(shù)策略。百泰派克生物科技始終關(guān)注dànbáizhì定量領(lǐng)域的技術(shù)前沿，致力于為生命科學(xué)研究者提供高質(zhì)量的定量蛋白組分析服務(wù)，助力科研探索更進(jìn)一步。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線(xiàn)性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

不同蛋白質(zhì)定量方法的優(yōu)勢(shì)與局限性分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹