1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。
2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。
3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。
4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×10⁶/ml。
5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。
6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。
8、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃过夜）→液氮。

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