1、弃去培养基废液。
2、消化：加入1ml 0.125％胰酶溶液，转动培养瓶使酶液浸没瓶底，温浴消化2-3分钟。
3、终止：用无血清培养基终止酶反应。
4、离心：收集中和了的培养液，于15ml 的离心管中 1000rmp 离心10分钟。
5、细胞重悬：弃去上清，加入1ml 无血清培养基用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。
6、细胞计数：血球计数板计数细胞，并换算出细胞数量。
7、接种分瓶： 将细胞接种到含4ml无血清培养基的培养瓶中，37℃，5% CO₂培养箱中培养。
8、镜检观察：次日观察贴壁率，细胞形态等。