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拒絕千篇一律,讓核酸和蛋白定量檢測(cè)更準(zhǔn)確有效!-Molecular Devices

時(shí)間:2019-11-11 閱讀:958
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拒絕千篇一律,讓核酸和蛋白定量檢測(cè)更準(zhǔn)確有效!

核酸及蛋白的定量是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)中許多復(fù)雜實(shí)驗(yàn)上游的基本檢測(cè)方法,如DNA測(cè)序、PCR/qPCR、克隆/轉(zhuǎn)染等。如何能夠準(zhǔn)確和靈敏對(duì)核酸及蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)是許多實(shí)驗(yàn)成敗與否的重要環(huán)節(jié)。各種方法被開發(fā)出來用于定量這些生物學(xué)成分,然而常見的檢測(cè)手段仍然是紫外分光光度法。即DNA、RNA在微孔板讀板機(jī)測(cè)定其溶液在260nm波長(zhǎng)處的光吸收值。原理是核酸的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健在260nm強(qiáng)烈光吸收值特點(diǎn);而蛋白質(zhì)溶液則是在280nm波長(zhǎng)處的光吸收值,原理是利用色氨酸的芳香性質(zhì)在280nm 處強(qiáng)烈光吸收值。與核酸定量檢測(cè)不同的是計(jì)算蛋白濃度會(huì)受到多種多樣的的氨基酸序列中的色氨酸殘基的影響。

當(dāng)然通常情況下也會(huì)在其他波長(zhǎng)處進(jìn)行輔助測(cè)量,以提供樣品純度的信息和檢測(cè)其他污染物。如進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)其260nm/280nm光吸收值作為樣品純度重要考慮因素,比值在1.8-2.0之間說明雜蛋白等物質(zhì)含量較低。

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但傳統(tǒng)光吸收檢測(cè)法,不足之處其低檢測(cè)線低僅250 ng/mL,低于這個(gè)濃度的DNA溶液使用微孔板讀板機(jī)的熒光法可進(jìn)行更準(zhǔn)確定量檢測(cè),如熒光法對(duì)dsDNA檢測(cè)下限可達(dá)到0.5pg/ul,而蛋白檢測(cè)下限可達(dá)10ng/ml,這里介紹Molecular Device公司各種微孔板讀板機(jī)可為核酸及蛋白質(zhì)檢測(cè)提供了多種可靠方案。結(jié)合SoftMax Pro 軟件強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理分析功能,可一鍵生成定量結(jié)果,并可根據(jù)用戶需求定制格式并導(dǎo)出數(shù)據(jù)。

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