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一起漲“姿勢(shì)”——那些年在我們身體里的基因表達(dá) - Molecular Devices

時(shí)間:2019-11-21 閱讀:952
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一起漲“姿勢(shì)”——那些年在我們身體里的基因表達(dá)      

近年來,阻礙人類健康長(zhǎng)壽的第*大殺手就是疾病,例如癌癥,是目前難攻克的疾病之一。疾病研究和藥物開發(fā)也一直是生命科學(xué)領(lǐng)域的專家學(xué)者不斷攻克的領(lǐng)域。而目前的研究顯示,人類的大多數(shù)疾病都會(huì)與細(xì)胞因子表達(dá)異常引起信號(hào)通路異常有關(guān)。

 

報(bào)告基因對(duì)于基因表達(dá)的研究來說是非常有用的工具,它可以代替要研究的目的基因,從而幫助我們了解目的基因的信號(hào)通路和相關(guān)的疾病。熒光素酶是常用的報(bào)告基因,使用光度計(jì)和化學(xué)發(fā)光功能的微孔板讀板機(jī)我們可以很容易的檢測(cè)到熒光素酶,另一方面,由于在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中其背景較低,因此具有很高的靈敏度。我們通常用螢火蟲熒光素酶表達(dá)水平高低反映出我們感興趣的基因在系統(tǒng)中的地位。而海腎來源的熒光素酶則更常在多熒光實(shí)驗(yàn)中作為第二種報(bào)告基因,來規(guī)范化多種在不同樣本中變化較大的指標(biāo)如轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞活力等。

 

NF- κB是參與細(xì)胞進(jìn)程中許多基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)者,如炎癥,免疫,分化,增殖和凋亡。腫瘤壞死因子α (TNF- α)可以激活細(xì)胞信號(hào)通路來降解NF- κB的抑制劑,從而促使其釋放并進(jìn)入核內(nèi),調(diào)節(jié)數(shù)百目的基因的表達(dá)。NF- κB通路的紊亂可以誘發(fā)多種疾病,如多發(fā)性硬化病,糖尿病,阿爾茲海默病等,因此利用合適的工具加深我們對(duì)NF- κB通路的理解是十分必要的。

     
     
圖1 NF-κB信號(hào)通路。TNF-α激活信號(hào)層級(jí)反應(yīng)使NF-κB抑制劑IKB降解,并釋放NF-κB轉(zhuǎn)錄因子。
 
     

 

SpectraMax® DuoLuc™ Reporter 試劑盒可以對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的螢火蟲和海腎熒光素酶進(jìn)行高靈敏度的定量。依次向微板孔中加入兩種適量的反應(yīng)試劑即可檢測(cè)熒光。這種雙熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)可以在歸一化檢測(cè)熒光信號(hào)(螢火蟲熒光)的同時(shí)提供持續(xù)表達(dá)的對(duì)照熒光信號(hào)(海腎熒光)。運(yùn)用SpectraMax® iD5 多功能微孔板讀板機(jī)、注射器系統(tǒng)和 SmartInject™ 技術(shù)可以將實(shí)驗(yàn)條件*優(yōu)化。在這里我們將展示如何在哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型中, 通過雙熒光報(bào)告檢測(cè)系統(tǒng)和SpectraMax iD5 微孔板讀板機(jī)來檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF- κB)的活性。

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