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上海北诺生物科技有限公司
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【原理】琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D－半乳糖和3,6－脱水－L－半乳糖的残基交替排列组成。琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材
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实验原理血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。实验方法材料：1．2g/L邻甲联苯胺溶液2．1%H2O23．10%醋酸溶液4．分光光度计方法：1.抽取静脉血2-3ml，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。2．按下表进行操作，用分光光度计，波长为530nm，以空白管调零，测定测定管的吸光度。试剂（ml）测定管空白管2g/L邻甲联苯胺溶液0.50.5患者血浆0.02/1%H2O20.50.5混
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蛋白质技术专题：血红蛋白电泳（hemoglobin electrophoresis）
实验原理血红蛋白电泳（hemoglobinelectrophoresis）目的是检出和确认各种正常和异常的血红蛋白。根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，血红蛋白的等电点小于缓冲液的pH时带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，Hb带正电荷向阴极泳动。在一定电压下，经过一定时间的电泳，不同的血红蛋白所带电荷不同，分子量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带，同时对电泳出的各区带进行比色或电泳扫描，可进行各种血红蛋白的定量分析。一般zui常用的是pH8.6醋 -
蛋白质技术专题：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测外源蛋白的表达
[实验原理]SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中zui经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。pGLO是将绿色荧光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖启动子之后的一种表达 -
（一）原理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统?！安涣低场眤ui大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中，电泳凝胶分为两层：上层胶为低浓度的大孔胶，称为浓缩胶或成层胶，配制此层胶的缓冲液是Tris-HCl，pH6.7；下层胶则是高浓度的小孔胶，称为分离胶或电泳胶，成胶的缓冲液是Tris
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蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。仪器用具：恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管（使用20,000rpm离心陀）使用高速离心机要注意：离心机及离心陀的温度要预冷*，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速不能超过zui高速限；液态氮及冰筒；37℃温水浴药品试剂：转型菌株pQG11/M15[pREP]单一菌落；LB/amp/kan及IPTG（1Mstock）；Lysisbuffer（50mMNa3P
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蛋白质技术专题：folin—酚试剂法（lowry法）测蛋白质含量
一、实验原理这种蛋白质测定法是zui灵敏的方法之一。过去此法是应用zui广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下， -
一、原理1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部zui先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而zui后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。（G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质）2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳离子的蛋白质，在层析时会吸附在柱材料上，而杂蛋白会洗下。后用NaCl梯度洗脱PPO，（NaCl为强离子交换剂，能将弱吸附在柱材料上的PPO置换下来）。粗酶液从而得到
