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上海北诺生物科技有限公司
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金属硫蛋日(metallothionein，MT)是富含金属及硫的可诱导性蛋白，它可被某些金属(Bi，Zn，Cu等)、激素（糖皮质激素）、细胞毒药物（顺铂及烷化剂）及其他与物理化学刺激相关的病理生理状况所诱导。MT广泛存在于哺乳娄动物除结缔组织外的几乎所有组织中，肝、肾、胰、肠中zui为丰富，从已有的研究中发现：MT增加可介导肿瘤细胞对烷化剂及DDP产生耐药性。耐DDP的细胞MT含量增加且MTmRNA过度表达。DDP耐药表型的逆转伴随MT含量增加且MTmRNA过度表达；用编码MT的真核细胞表达载
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标签：免疫筛选根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质，从而筛选出目的基因的克隆。实验方法基本方案实验材料cDNA试剂、试剂盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿异戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸钠免疫沉淀缓冲液仪器、耗材转子硝酸纤维滤膜离心管微量多孔洗涤仪实验步骤1.往微量滴定板的每孔中加入250μl含适当抗生素的选择性BHI培养液，并分别接种独立的cDNA克隆，37℃温育过。2.在250ml烧瓶中加入50mlBHI/抗生素培养液，以1
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一、实验目的掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。二、实验原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。三、实验设备1、样品筛：孔径200μm；2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；3、恒温水浴：可控温30±0.5℃；4、试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子；5、精密计时器；6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机7、分析天平．感量0.1mg；8、移
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标签：蛋白质提取粗分离分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，zui后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。实验方法硫酸铵盐析法实验方法原理分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，zui后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出
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4，洗脱方式的选择,离子交换色谱洗脱方式有三种：一是改变缓冲液pH，使蛋白质从吸附状态变为解吸附状态。如在阴离子交换色谱中，通过降低流动相pH使吸附在柱子上的带负电荷的蛋白质带正电，从而达到解吸附，在阳离子交换色谱中则是通过升高流动相pH的方法达到解吸附；二是增加缓冲液的离子强度，将吸附强的分子从离子交换剂上替换下来；三是缓冲液pH和离子强度同时改变。无论哪一种方法，都可用阶段洗脱和梯度洗脱两种方式进行。阶段洗脱是用几个不同pH缓冲液或几个不同盐浓度的缓冲液逐步进行洗脱。即pH和离子强度变化不连
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液相色谱（HighRerformanceLiquidChromatography,HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做液相色谱。它是60年代中期才建立的一种快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。和经典常压色谱相比它有以下特点：1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大缩短了纯化蛋白质的时间；2、分辩率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质；3、适应面广，灵活性强，几乎所有的蛋
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基本原理TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。材料和试剂1，*培养基（1）10%FCS-DMEM培养液（V/V）。2，*培养基（2）3%FCS-DMEM培养液（V/V）0.5-1μg/ml放线菌素-D。3，0.05%结晶紫溶液：取50mg结晶紫，用20ml无水乙
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标签：磷酸氨基酸分析鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时，通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳，可以便利地鉴定标记的磷酸氨基酸。实验方法酸水解法实验材料磷酸化蛋白质试剂、试剂盒印度墨汁HCl磷酸氨基酸混合物电泳缓冲液茚三酮仪器、耗材PVDF膜烘箱离心机离心管纤维素薄层色谱滤纸薄层电泳仪实验步骤1.放射性标记的磷酸化蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行制备电泳。电转移至PVDF膜上，用水洗膜数次，不要让膜变干。2.用30~50ml印度墨
