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  • 生物化学技术专题:微生物的糖发酵

    一、单糖发酵试验(一)、实验原理单糖发酵是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其zui终浓度为0.75~1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18~24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成,小倒管内则聚集有气泡;不分解,则指示剂不变色。(二)、实验材料1.菌种:大肠杆菌,伤寒杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。2.培养基:葡萄糖发酵管,乳糖发酵管等。(三)实验方法1.将伤寒杆菌,大肠杆菌按照液体接种方法分
  • 蛋白质技术专题:细胞凋亡的几种检测方法

    一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。4、透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒
  • 蛋白质技术专题:核蛋白的免疫荧光定位实验

    标签:核蛋白免疫荧光定位免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展zui早的一种免疫荧光技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。实验方法免疫荧光定位法实验方法原理免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量,以达
  • 蛋白质技术专题:ELISA的操作要点

    的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。一、标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血
  • 蛋白质技术专题:凝胶过滤层析实验

    标签:凝胶过滤层析凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。实验方法蛋白质的凝胶过滤分离实验材料蛋白质试剂、试剂盒凝胶过滤缓冲液仪器、耗材布氏漏斗凝胶过滤层析柱分光光度计实验步骤1.如果凝胶过滤的介质是干粉,则需在凝胶过滤缓冲液中*溶胀。2.在远离过往通道及直接光照的恒
  • 蛋白质技术专题:蛋白质的电转实验

    标签:蛋白质电转很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物,如重氮化纤维素膜(DPT,DBM)、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等,但用的zui多的还是硝酸纤维素膜(NC膜),该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合,结合能力约为80μg/cm2。实验方法基本方案实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材电转移槽电泳仪实验步骤1.剪6块3MM滤纸和一块NC膜。2.将剪好的3MM滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3.按下列过程安装转移装置,将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中,在塑料支
  • 蛋白质技术专题:蛋白质回收实验

    标签:蛋白质回收试验,是“对照试验”的一种。当所分析的试样组分复杂,不*清楚时,向试样中加入已知量的被测组分,然后进行测定,检查被加入的组分能否定量回收,以判断分析过程是否存在系统误差的方法。所得结果常用百分数表示,称为“百分回收率”,简称“回收率”。实验方法基本方案实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDSDTT脱色液染色液仪器、耗材电泳仪透析膜实验步骤1.凝胶浸泡在染色液中于室温缓慢摇动染色15~20min,然后移至脱色液中于4℃温和摇动下脱色2~3h。2.切下染色后的凝胶条带,于4℃水中浸泡2~3h
  • 蛋白质技术专题:谷胱甘肽-S-转移酶活性测定

    谷胱甘肽S-转移酶是指催化具有亲电取代基的外源性化合物与内源的还原谷胱甘肽(GSH)反应的酶??纱呋嘀址从Πㄌ?、芳基、芳烃基、烯基和氧基的转移反应。谷胱甘肽S-转移酶是谷胱甘肽结合反应的关键酶,催化谷胱甘肽结合反应的起始步骤,主要存在于胞液中。谷胱甘肽S-转移酶有多种形式,根据作用底物不同,至少可分为下列5种:1、谷胱甘肽S-烷基转移酶:催化烷基卤化物和硝基烷类化合物的谷胱甘肽结合反应。主要存在于肝脏和肾脏。2、谷胱甘肽S-芳基转移酶:主要催化含有卤基或硝基的芳烃类或其它环状化合物的谷胱甘
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