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武汉原生原代生物医药科技有限公司

人脐静脉内皮细胞消化和复苏的步骤方法

时间:2022-2-23 阅读:569
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  人脐静脉内皮细胞在进行血管内皮细胞实验时,通常选用的细胞模型为人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,简称HUVECs)。而不是直接采用静脉血管内皮细胞或动脉血管内皮细胞。原因是脐静脉内皮细胞具有干细胞的潜能,理论上可以传代50-60次。
  人脐静脉内皮细胞消化方法:消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液,分别配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合。在细胞传代或冻存前先消化细胞。具体操作如下:吸净培养液,每瓶加消化液1ml,摇匀使其布满培养瓶细胞面。37℃消化2-5分钟。显微镜下看细胞回缩成圆形后,轻轻震动使绝大部细胞脱落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管轻轻吹打培养面使细胞*脱落后,吸至15ml无菌离心管内。4℃1500rpm离心10分钟弃上清,再用中和液洗涤细胞,离心弃上清,加适量RPMI-1640液,混匀后取10ul 细胞悬液加10ul台盼蓝混匀后作细胞计数,按需要做步骤四或五。
  人脐静脉内皮细胞细胞复苏:
  从液氮中取出细胞冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻至管内残留一点冰屑。用75%酒精擦拭冻存管后,将内容物吸至一15ml无菌离心管中,逐滴加入预温至37℃的RPMI-1640培液4-5ml混匀,室温1500rpm离心10分钟弃上清。再用RPMI-1640培液4-5ml洗涤一次,离心后弃上清,加HUVEC*培养液4-5ml备用,每支HUVEC冻存管含细胞量为5×105个。

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