PriCells: 从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分

试剂和器材： 
1. 匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
2. 按要求向溶液加入蛋白酶抑制剂；
3. 磷酸盐缓冲液；
4. 低速冷冻离心机，配有30—40ml离心管的吊桶式离心转子；
5. 高速离心机，配有30—40ml离心管的固定角转子；
6. 用于肝脏：Potter-Elvehjem（聚四氟乙烯树脂和玻璃）匀浆器（30—40ml），连接高转矩桥式电动机（半导体开关控制）；
7. 用于细胞：滚珠轴承匀浆器或带23号或25号针头的注射器；
8. Dounce匀浆器（宽松配制，Wheaton B型）；
9. 20ml规格注射器（内径约0.8mm），带金属套管针；

实验方法：
   所有操作须在0—4℃下进行。
1. 对肝脏：用剪刀非常细微地剪碎组织（或使用组织切碎机），用匀浆介质转移到Potter-Elvehjem匀浆器中（每2.5g组织使用10ml介质）。研杵研磨6次左右进行匀浆（500—700r/min）；
2. 对细胞：在5ml磷酸盐缓冲液中洗涤（1—3）×108个细胞，再换用匀浆介质进行洗涤。在3ml匀浆介质中混悬细胞，在滚珠轴承匀浆器中来回5次匀浆；
3. 800g下离心10min，沉淀核、细胞碎屑和未破碎细胞；
4. 倾倒或吸?。ㄊ褂谜牍芎妥⑸淦鳎┥锨?，置于冰上；
5. 在宽松配制Dounce匀浆器中研杵研磨2—3次进行匀浆，使用10ml匀浆介质重悬沉淀（细胞则使用5ml）；
6. 重复离心，合并上清；
7. 将合并的上清在3000g下离心10min；
8. 将第7步得到的上清在15000g下离心10min；
9. 用10ml（细胞对应5ml）匀浆介质重悬轻线粒体沉淀，在宽松配制Dounce匀浆器中用研杵轻轻地研磨2—3次；
10. 15000g下离心10min；
11. 在适当的介质中重悬沉淀用于分析或进一步处理；