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PriCells: 正常视网膜米勒细胞原代培养
PriCells: 正常视网膜米勒细胞原代培养
实验材料：
1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明质酸酶混合消化液；
4. 消毒无菌的手术器械若干；
实验方法：
1. 取材
（1）取自人的供体眼球；
1） 经常规消毒程序消毒后，于锯齿缘后约1mm处环形切开眼球，去除前段及玻璃体；
2） 用无齿小镊子轻轻剥取视网膜组织，并用眼科小剪子剪去视乳头周围的视网膜及血管；
3） 用PBS液稍洗，去除黏附的色素上皮细胞。置于盛有平衡盐溶液的培养皿中；
（2）取自兔的供体眼球：当取出视网膜组织后，在解剖显微镜下用眼科小剪刀剪去髓放线部分及血管；
2. 原代培养；
1） 在处理完毕的视网膜组织中加入胰蛋白酶和透明质酸酶混合消化液，于37℃调间隙消化30min；
2） 用有血清培养液终止消化。经吹打后，将细胞悬液离心（800r/min）5min；
3） 用培养液重新悬浮细胞，并吸走絮状的纤维样物质；
4） 按4×104～6×104个细胞/ml的密度进行接种；
5） 以常规方法培养。24h后取出培养瓶，置换培养液，以去除没有贴壁的其它细胞；
6） 每周换液2次，在细胞分裂增长至基本融合成单层时传代；
PriCells提供：
1. 各种原代细胞特制基础培养基；
2. 各种原代细胞培养特制添加剂；
3. 原代细胞分离试剂盒；
4. 原代细胞鉴定试剂盒；
5. 原代细胞总蛋白质抽提物；
6. 原代细胞总RNA；
7. 原代细胞总DNA；