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PriCells: 正常小梁细胞原代培养
PriCells:正常小梁细胞原代培养
实验材料：
1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；
3. 器械：小梁剪与无齿镊等；
4. 消毒液：200IU/ml的庆大霉素生理盐水；
5. 培养液：基础液由DMEM培养基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。应用液是在基础液内补加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml，并用5% NaHCO3调节pH至7.0—7.2；
6. 培养器皿：培养瓶、24孔培养板或培养皿若干；
实验方法：
1. 将离体的供体眼球用200IU/ml的庆大霉素溶液浸泡消毒5min；
2. 无菌条件下，沿角膜缘后5mm处环形剪开眼球，剪断晶状体悬韧带，去除晶状体和玻璃体；
3. 将眼前段倒放在培养皿中，在显微镜下用无齿镊把虹膜抹离角膜内皮面，暴露房角结构。用角膜剪紧贴虹膜与巩膜的附着部位，剪除色素膜；
4. 以PBS溶液或平衡盐溶液轻微chong洗小梁组织表面。用小梁剪伸入Schlemm管，楔形剪取小梁组织。前界至Schwalbe线，后界至巩膜嵴?；沸稳〕鲆豢樾×鹤橹?，置于培养皿中；
5. 经PBS漂洗后将小梁组织剪碎，几乎成浆状；
6. 用无齿镊挑起少许小梁组织，接种于24孔培养板后培养瓶皿中，轻轻铺平。待组织稍干后加入适量培养液，在CO2培养箱静置培养。第四天后开始换液，每周2次；
PriCells提供：
1. 各种原代细胞特制基础培养基；
2. 各种原代细胞培养特制添加剂；
3. 原代细胞分离试剂盒；
4. 原代细胞鉴定试剂盒；
5. 原代细胞总蛋白质抽提物；
6. 原代细胞总RNA；
7. 原代细胞总DNA；