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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2025-05-19 13:09:35瀏覽次數(shù):1045次
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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究的專業(yè)技術(shù)服務(wù),主要用于基因表達(dá)調(diào)控、miRNA靶基因驗(yàn)證、啟動(dòng)子活性分析等領(lǐng)域
。以下是該服務(wù)的核心內(nèi)容和技術(shù)要點(diǎn):
?miRNA靶基因驗(yàn)證?
將預(yù)測的mRNA/lncRNA靶序列插入報(bào)告基因載體,通過熒光素酶活性變化驗(yàn)證miRNA的靶向作用
常用載體:psiCHECK2(R-Luc 3'UTR插入靶序列,F(xiàn)-Luc作內(nèi)參)
?啟動(dòng)子活性分析?
通過截短或突變啟動(dòng)子區(qū)域(通常2kb片段),檢測熒光素酶活性變化以確定功能區(qū)域
常用載體:pGL3-Basic(F-Luc上游插入啟動(dòng)子)
?轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控驗(yàn)證?
共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)載體與啟動(dòng)子報(bào)告載體,通過活性變化分析調(diào)控關(guān)系
?ceRNA機(jī)制研究?
驗(yàn)證lncRNA/circRNA通過競爭miRNA調(diào)控靶基因的表達(dá)
?載體構(gòu)建?:將目標(biāo)序列(如啟動(dòng)子、UTR等)克隆至報(bào)告載體
?細(xì)胞轉(zhuǎn)染?:使用高效轉(zhuǎn)染試劑(如LipoFiter)或病毒系統(tǒng)
?雙熒光檢測?:
裂解細(xì)胞后,依次加入LARII(測F-Luc活性)和STOP&GLO Reagent(測R-Luc活性)
?數(shù)據(jù)分析?:以F-Luc/R-Luc比值校正轉(zhuǎn)染效率,計(jì)算相對(duì)活性
?專業(yè)預(yù)測支持?:部分提供商免費(fèi)提供實(shí)驗(yàn)前的結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測服務(wù)
?定制化方案?:可針對(duì)不同樣本定制質(zhì)?;騧iRNA mimics
?高靈敏度檢測?:采用均質(zhì)法輝光型試劑盒(如Promega),減少操作誤差
?案例1?:驗(yàn)證某miRNA抑制靶基因表達(dá),熒光素酶活性下降50%以上
?案例2?:發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子X通過結(jié)合啟動(dòng)子Y的-500bp區(qū)域增強(qiáng)表達(dá)
實(shí)驗(yàn)需設(shè)置背景對(duì)照、陰性對(duì)照及陽性對(duì)照
推薦使用底部透明的96孔板以避免轉(zhuǎn)板誤差
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