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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2025-05-20 15:06:10瀏覽次數(shù):1603次
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?樣本制備?
肝組織需經(jīng)4%多聚甲醛固定,石蠟包埋切片(5μm)或冷凍切片(8-10μm),脫蠟后需抗原修復(fù)處理
肝硬化模型可通過(guò)CCl?皮下注射或膽總管結(jié)扎(BDL)誘導(dǎo),纖維化評(píng)估需結(jié)合Masson染色
卵圓細(xì)胞增殖模型采用2-乙酰氨基芴(2-AAF)灌胃聯(lián)合肝部分切除術(shù),可檢測(cè)OV6、CK19等標(biāo)志物
?病毒檢測(cè)?
乙型肝炎病毒(HBV)檢測(cè)中,HBsAg陽(yáng)性反應(yīng)物分布于肝細(xì)胞胞核、胞漿及胞膜,HBcAg則主要位于胞核和胞漿
?染色方法?
常用SABC法或熒光標(biāo)記,一抗孵育條件多為4℃過(guò)夜(如檢測(cè)α-SMA、Collagen I等纖維化標(biāo)志物)
阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶需3% H?O?處理,血清封閉時(shí)間建議30分鐘
?信號(hào)檢測(cè)?
DAB顯色后,陽(yáng)性信號(hào)表現(xiàn)為棕黃色顆粒(如PCNA檢測(cè)需觀察細(xì)胞核著色)
熒光染色需避光操作,常用Cy3/FITC標(biāo)記二抗
?病理評(píng)估?
肝纖維化模型中,活化的肝星狀細(xì)胞(HSCs)可通過(guò)α-SMA、GFAP抗體鑒別,門脈區(qū)成纖維細(xì)胞則顯示Vinculin陽(yáng)性
褪黑素干預(yù)后,PI3K/AKT通路蛋白(如P-AKT)表達(dá)降低提示抗纖維化效應(yīng)
?定量方法?
使用圖像分析軟件計(jì)算陽(yáng)性區(qū)域面積比(如丹參酮ⅡA可抑制肝衰竭組織PCNA表達(dá))
病毒檢測(cè)時(shí)需設(shè)陰性對(duì)照,HBV/HEV共感染樣本可能出現(xiàn)100% HEV陽(yáng)性率
冷凍切片應(yīng)避免反復(fù)凍融,石蠟切片脫蠟低易導(dǎo)致非特異性染色
動(dòng)物模型需規(guī)范分組(如褪黑素劑量需設(shè)2.5-10mg/kg梯度)
如需特定蛋白(如AFP、CD34)的檢測(cè)方案,可結(jié)合雙染技術(shù)或原位雜交進(jìn)一步驗(yàn)證
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