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上海吉至生化科技有限公司

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葡聚糖凝膠C-25使用方法簡單介紹

2021-11-22 閱讀(958)

 

葡聚糖凝膠C-25是顆粒狀,使用時需要溶脹,其溶脹比取決于所使用的緩沖溶液,不同溶液中的溶脹比不同,而且存在較大差異。溶脹時不能使用磁力攪拌,否則易導(dǎo)致凝膠破碎。
預(yù)處理:
稱取所需量的葡聚糖凝膠C-25,置于 50~100 倍蒸餾水或者上樣平衡液中,溶脹,室溫條件下一般需要溶脹1~2天,沸水中一般需要2小時。
按每克葡聚糖凝膠C-25加0.5(MHCl)15ml的比例,將葡聚糖凝膠C-25浸泡于0.5M、HCl中,攪勻,靜置30分鐘,裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾,并反復(fù)用蒸餾水抽洗至pH呈中性;然后以0.5M、NaOH同上操作過程處理,最后以0.5M、HCl再處理一次。
裝柱:
裝柱按照標準操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度,凝膠裝柱前需要脫氣 。
平衡:
使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的
電導(dǎo)和pH*一致。
上樣:
根據(jù)目標產(chǎn)物濃度和凝膠的載量確定上樣量。
清洗:
上樣完畢后,再使用上樣緩沖液平衡柱子,清洗掉不結(jié)合的蛋白和雜質(zhì),直至流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH*一致。
洗脫:
使用增大緩沖液中鹽離子濃度或者增加 pH 的連續(xù)洗脫或者梯度洗脫。
再生:
在柱上先用1~2M、NaCl洗去柱上的雜蛋白,再用蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預(yù)處理過程將葡聚糖凝膠C-25再處理一遍即可。

存儲
葡聚糖凝膠C-25干粉保存于4~25℃、干燥、通風(fēng)、清潔處;溶脹后的凝膠保存于4~8℃
20%乙醇溶液或0.01M、NaOH中。

 



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