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上海吉至生化科技有限公司

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分子生物素與分子蛋白的結(jié)合實驗步驟

2021-11-19 閱讀(301)

實驗步驟:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸鹽緩沖液中,并計算溶解的毫摩爾數(shù)。如果蛋白含有不恰當(dāng)?shù)木彌_液(如Tris或者甘氨酸),可以通過在PBS中透析或濃縮的方法除去。計算:蛋白質(zhì)量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白質(zhì)的毫摩爾數(shù)。
2. 在打開之前,平衡生物素至室溫。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超純水中,加入足夠量濃度的生物素,一般對于10 mg/ml 蛋白來說超過12倍分子數(shù),對于2 mg/ml 蛋白溶液應(yīng)超過20倍,或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室溫30分鐘,或冰上放置2小時。
4. 用30 ml PBS預(yù)洗純化柱,上樣,加入與欲收集量相同的緩沖液,收集0.5 ml 或1 ml 于單獨的管中。
5. 以280 nm 的吸收值測定蛋白含量。
6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用,可加入疊氮鈉、甘油等保存。

 



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