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詳細(xì)介紹
小鼠陰道平滑肌原代細(xì)胞
小鼠陰道平滑肌細(xì)胞分離自陰道組織；陰道位于膀胱、尿道和直腸之間，是一個(gè)富有彈性的管狀器官。它在生殖過程中具有多種生理功能，是連接子宮與外陰的通道，是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路，也是一個(gè)重要的性交器官。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層，即黏膜層、肌層和外膜。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在機(jī)體動(dòng)脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。陰道平滑肌分離自陰道壁肌層組織，平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。
英文名稱 | Mouse Vaginal Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 陰道 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8543 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：小鼠陰道平滑肌細(xì)胞
組織來源：陰道
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠陰道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠陰道平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠陰道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
TE-10細(xì)胞，食管癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,TE-10細(xì)胞 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21 | 核糖核苷酸還原酶1抗體 |
T細(xì)胞激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體 | 細(xì)胞死亡誘導(dǎo)蛋白抗體 |
錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族3抗體 | 電壓門控性鉀通道蛋白亞基kv6.1抗體 |
元衍生孤兒受體1抗體 | 親環(huán)素相關(guān)蛋白1抗體 |
血管加壓素激活鈣啟動(dòng)受體蛋白1抗體 | 甲狀腺激素受體相互作用蛋白4抗體 |
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B5 | 小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞);YAC-1 |
A2細(xì)胞，人肺腺癌細(xì)胞 大鼠腎細(xì)胞,NRK-52E細(xì)胞 CL-0162MS1(小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | U-2 OS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人顱骨造骨細(xì)胞RNAHCO miRNA5 μg | 豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1 |
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5 | CL-0296MX-1(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
HL-60細(xì)胞，白血病原髓細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H23細(xì)胞 MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 | 小鼠陰道平滑肌原代細(xì)胞電壓門控性鉀通道蛋白亞基kv6.1抗體 |
猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A | A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549 cells in human non small cell lung cancer F-12K+10% FBS |
SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系);293T/17 人呼吸道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002 |
CM-H032人食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 天冬蛋白酶家族蛋白抗體 |
鈣調(diào)蛋白激酶激酶α抗體CaMKKα | 人細(xì)胞;Hela P10s-11F |
原鈣粘附蛋白18抗體 | 酸激酶-M2抗體 |
類固醇受體激活蛋白1抗體 | 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B5 |
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