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【應(yīng)用文章下載】抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測過程詳解-Molecular Devices

時間:2019-8-23 閱讀:754
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抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測過程詳解
 
血小板是從骨髓成熟的巨核細(xì)胞胞漿解脫落下來的小塊胞質(zhì),雖然僅占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.05% ,但是它在血管損傷后的止血過程中起著重要作用。除了自然止血外,它還影響著血管中血栓的形成,進(jìn)而形成血栓性疾病,如心梗和缺血性中風(fēng)等
 
正常生理?xiàng)l件下,未受傷的血管系統(tǒng)中血小板不發(fā)生粘附、活化和聚集。血小板活化在血栓形成中起重要作用,活化可分為初級活化和進(jìn)一步活化。進(jìn)一步活化中有很多活性物質(zhì)如膠原、二磷酸腺苷(ADP)等都可以與血小板膜上相關(guān)受體結(jié)合,進(jìn)行進(jìn)一步激活,如大家熟知的GPCRs受體。血小板胞質(zhì)溶膠內(nèi)游離鈣離子濃度的變化在血小板進(jìn)一步激活中扮演至關(guān)重要的角色,當(dāng)其鈣離子升高會促進(jìn)血小板活化,反之亦然。
 
鈣離子作為細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,參與了多數(shù)生物活動過程。血小板活化過程中伴隨著細(xì)胞內(nèi)鈣離子的跨膜內(nèi)流和血小板鈣庫的鈣離子釋放,鈣離子濃度升高后,血小板鈣庫的質(zhì)膜上的鈣離子ATP酶將鈣離子重新轉(zhuǎn)運(yùn)回到鈣庫之中。鈣離子流的變化是基于毫秒級別,不通過特殊、有效的檢測手段很難在較短時間內(nèi)獲得大量、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 
目前較為主流的細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測手段是熒光探針標(biāo)記法,如 Flou-4 、Indo-1 、Fura-2等。在眾多熒光探針種類中,F(xiàn)ura-2熒光探針以其自身優(yōu)勢深受大家喜愛,可直接用于微孔板讀板機(jī)系統(tǒng)或成像系統(tǒng)對其進(jìn)行觀察。傳統(tǒng) Fura-2 熒光探針需要每個步驟進(jìn)行清洗,相對比較繁瑣。Molecular Devices 出品的 Fura-2 QBT 具有*利的防止信號屏蔽的作用,F(xiàn)lexStation 3 是MD推出的一款內(nèi)置多通道自動移液裝置,具有的Flex模式可以在短時間(毫秒級)獲得有效信號強(qiáng)度, 兩者結(jié)合能讓您單位時間內(nèi)獲得準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果。
 
     
圖一:FURA-2 QBT 鈣流實(shí)驗(yàn)的比值法分析      
     
本次我們將介紹 Fura-2 QBT鈣流試劑盒在FlexStation 3 微孔板檢測平臺如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和軟件設(shè)置,獲得相應(yīng)結(jié)果后如何分析。我們提供了可重復(fù)、可量化操作的解決方案,適合于高通量血小板細(xì)胞鈣離子檢測的方式,可用于激動劑EC50和拮抗劑IC50檢測和篩選工作。

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