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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
|---|
产品介绍
产品简介
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其速度和稳定性大幅度提高。此外，该产品经过翌圣生物特别研发的精制工艺处理，产品中核酸酶、宿主gDNA以及其他背景菌gDNA残留极低，适用于快速全预混RT-qPCR试剂开发。
产品信息
货号 | 14614ES92 / 14614ES97 / 14614ES98 |
规格 | 10 KU / 100 KU / 200 KU |
单位定义 | 以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 |
组分信息
组分名称 | 14614ES92 | 14614ES97 | 14614ES98 |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 500 μL | 1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
1.两步法RT-PCR/qPCR（第一链cDNA合成）
1）RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2）逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 13 μL |
5×RT Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 200 U |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 20 μL |
3）逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15-30 min |
85℃*** | 5 min |
*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-60℃。
***85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
4）逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
2.一步法RT-PCR/qPCR
该逆转录酶适用于一步法RT-PCR/qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-40 U逆转录酶，最适逆转录条件为50℃ 15min，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量，多重体系建议提高酶量。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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