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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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- 地址：
- 上海市浦东新区天雄路166弄1号3楼
- 网址：
- www.yeasen.com
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业,制药/生物制药 |
|---|
产品介绍
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
产品信息
货号 | 13487ES08 / 13487ES24 / 13487ES96/13487ES98 |
规格 | 8 T / 24 T / 96 T/ 1000 T |
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 13487ES08 | 13487ES24 | 13487ES96 | 13487ES98 |
13487-A | 4 × Frag/Prime Buffer | 32 μL | 96 μL | 384 μL | 4 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309ES试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
温度 | 时间 |
热盖 105°C | On |
25 °C | 10 min |
42°C | 15 min |
70°C | 15 min |
4°C | Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Input RNA | 13 |
4×Frag/Prime Buffer | 4 |
Total | 17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12309ES说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
名称 | 体积 (μL) |
Fragmented RNA | 17 |
Strand Specificity Reagent | 6 |
1st Strand Enzyme Mix | 2 |
Total | 25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
4. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为13 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
