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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 生物产业 |
|---|
产品介绍
产品描述
Oligo dT 磁珠为表面包被有Oligo dT的1 μm磁性聚合物微球，具有单分散和磁响应性强等特点。磁珠通过Oligo dT与真核生物mRNA的poly A尾结构互补配对，快速高效从总RNA、细胞裂解物和带有poly A的体外转录RNA样本中分离纯化mRNA。纯化的mRNA可用于RT-PCR、cDNA文库构建、RACE、探针杂交和转录组测序等应用。
产品性质
基质 | 聚合物磁珠 |
配体 | Oligo dT |
平均粒径 | 1 μm |
磁核 | Fe3O4 |
壳层 | 聚合物 |
磁性类型 | 超顺磁性 |
应用方向 | mRNA分离纯化 |
应用方式 | 手动/自动 |
dA30结合量 | >300 pmol/mg 磁珠 |
mRNA结合量 | ~2 μg/mg磁珠 |
磁珠浓度 | 10 mg/mL |
保存溶液 | PBS, pH 7.4, 0.05% Proclin-300 |
保存条件 | 4℃ |
保质期 | 2年 |
运输和保存方法
冰袋运输。4℃储存，有效期2年。
注意事项
1. 磁珠严禁冷冻，否则可能导致磁珠碎裂，影响mRNA 纯化效果。
2. 所有用于mRNA提取的buffer和耗材都应该是RNase-free，操作过程中应佩戴一次性手套和口罩避免RNase的污染。
3. 磁珠取用前应恢复至室温，且充分混匀。
4. 若总RNA样本降解严重，无法得到高质量的mRNA。
5. 磁珠用量相对于样本量不可过低，否则会导致mRNA回收率低和rRNA残留过高。
6. 磁吸时间不应少于1min，磁吸后吸弃上清液时避免损失磁珠。
7. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。
8. 提取到的mRNA最好立即用于RT-PCR。如果需要保存，建议将mRNA从磁珠上洗脱下来，可在洗脱液中添加RNase抑制剂，-80℃冻存。
实验前准备
1. 自配试剂
试剂名称 | 组分 |
结合液 | 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA |
洗涤液 | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA |
洗脱液 | Nuclease-Free Water 或 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 |
注：所有试剂都使用DEPC水配制，为避免磁珠粘附管壁可在结合液和洗涤液中添加终浓度为0.01%的Tween-20。
2. 自备设备和耗材：磁性分离架，水浴锅或金属浴，冰浴，漩涡振荡器，旋转混合仪，1.5 mL离心管(RNase-free)，微量移液器及吸头(RNase-free)。
3. 将磁珠恢复至室温，且充分重悬。
4. 设置水浴锅或金属浴为65℃。
操作方法
以使用50 μL磁珠，从100 μg总RNA中纯化mRNA为例?？梢愿菅居昧堪幢壤械髡?/span>
1. 使用DEPC水将100 μg总RNA的体积调整为100 μL。
注：若总RNA的浓度低于1 μg/μL，可增加样本体积，并调节步骤6的结合液用量和样本体积相同；或者直接使用100 μL样本，以下步骤不变。
2. 将上述总RNA样本于65℃变性处理5 min，立即置于冰浴。
3. 吸取50 μL均匀重悬并恢复至室温的Oligo dT磁珠于1.5 mL离心管(RNase-free)，磁吸，吸弃保存液。
4. 使用100 μL结合液重悬磁珠，磁吸，吸弃上清液。
5. 重复步骤4。
6. 使用100 μL结合液重悬磁珠。
7. 将步骤2中处理好的总RNA样本加入磁悬液中，混匀，室温旋转混合10 min。
8. 磁吸，吸弃上清液。
9. 使用200 μL洗涤液重悬磁珠，磁吸，吸弃上清液。
10. 重复步骤9。
注：使用10 μL移液器吸头尽量吸弃上清液。
11. 加入20-100 μL洗脱液，吹打重悬磁珠，室温混匀5min，磁吸，将纯化的mRNA溶液转移至新的EP管(RNase-free)。
注：65℃-75℃加热洗脱，可增加洗脱效率。
检测分析
总RNA中mRNA的含量一般为1%-5%, 可以使用Nanodrop或Qubit测量纯化的mRNA浓度。
可以使用RT-qPCR或Agilent 2100 Bioanalyzer及配套的试剂检测rRNA残留情况。
HB230106
