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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100U |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10145ES60 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元) |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase Hieff Canace® 耐U+高保真DNA聚合酶 | 10145ES60 | 100 U | 395.00 |
10145ES76 | 500 U | 1995.00 |
耐U+高保真DNA聚合酶描述
Hieff Canace Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性改善显著，且*克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有的扩增效率和广泛的模板适应性，适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
10145ES60（100 U） | 10145ES76（500 U） | ||
10145-A | Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL） | 100 μL | 500 μL |
10145-B | 2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 3×1 mL | 15×1 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20 °C保存，有效期一年。
产品应用
使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增
使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增
使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！
使用方法
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1. 推荐反应体系
所有操作应于冰上进行，2×Canace® Uracil+ PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20 °C保存。
表1 PCR扩增反应体系
组分 | 体积 (µL) |
模板DNA | X |
2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 |
正向引物 (10-25 μM） | 1-2.5 |
反向引物 (10-25 μM） | 1-2.5 |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL） | 1 |
ddH2O | Total to 50 |
【注】：
1) 模板：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率。
2) dNTPs：反应体系中dNTPs使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTPs中不含dUTP，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。
3) 聚合酶浓度：在50 μL体系中，推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化，请勿超过2 U。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4) Mg2+终浓度：反应体系中Mg2+终浓度为2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨询，要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的buffer。
2．推荐反应程序
表2 PCR扩增反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98 °C | 1 min | 1 |
变性 | 98 °C |
| 1-15（根据实验要求） |
退火 | 60 °C | 30 sec | |
延伸 | 72 °C | 30 sec | |
终延伸 | 72 °C | 5 min | 1 |
Hold | 4 °C | - | - |
【注】：
1)预变性温度推荐使用98 °C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2) 退火温度推荐使用60 °C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3) 延伸温度和时间：推荐使用72 °C。延伸时间根据实际需要进行调整。
