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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 货号 | 13775ES60 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） | *（元） |
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) | 13775ES60 | 100 T | 3565.00 | 1100.00 |
13775ES80 | 1000 T | 28515.00 | 9800.00 | |
13775ES92 | 10000 T | 228115.00 | 78400.00 |
产品描述
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。*的Buffer和酶的设计，可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer，Enzymes Mix等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。
本试剂盒酶mix中匹配冻干?；ぜ?，可以直接用于冻干。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | ||
13775ES60 (100 T) | 13775ES80 (1000 T) | 13775ES92 (10000 T) | ||
13775-A | 4×Hifair® V Lyo-Buffer | 600 μL | 6 mL | 60 mL |
13775-B | MgCl2 (25 mM) | 500 μL | 5 mL | 50 mL |
13775-C | 10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix | 240 μL | 2.4 mL | 24 mL |
【注】：1) 4×Hifair® V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
2) 10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex，Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™，Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™，Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000，Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96，Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期9个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
实验过程中请使用RNase free耗材。
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
反应体系（以25 μL为例）
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
4×Hifair® V Lyo-Buffer | 6 | 1× |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix | 2.4 | - |
MgCl2 (25 mM) | 3 | |
Primer Mix (10 μM) | 各0.4 | 0.16 μM |
Probe Mix (10 μM) | 各0.2 | 0.08 μM |
模板 RNA | 1-5 | - |
RNase Free H2O | to 25 | - |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度*，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 逆转录 | 50°Ca | 10 min | 1 |
2 | 预变性 | 95°C | 5 min | 1 |
3 | 扩增反应 | 95°C | 15 sec | 45 |
60°Cb | 30 secc |
【注】：
a) 逆转录：42°C或者50°C均可，时间 10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC*推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60°C。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
本试剂可以直接用于冻干，也可以进一步在此基础上针对不同引物，进一步摸索辅料，本试剂的标准冻干程序如下：
温度 | 斜率时间 | 时间 | 真空 mbar | 备注 | ||
预冻 | 1 | -45°C | —— | 4 h | —— | 常温最快速率降温 |
2 | -45°C | —— | —— | 保持，根据包材验证保持时间 | ||
真空 | 3 | -45°C | —— | 0.01 | ||
升华阶段 | 4 | -40°C | 1 h | 10 h | 0.01 | 无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温 |
5 | 0°C | 1 h | 10 h | 0.01 | ||
6 | 0.01 | 无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温 | ||||
解析干燥 | 7 | 25°C | 1 h | 4 h | 0 | |
含水量控制 | 8 | 压升测试重试时间：30 min | 压升测试：2 min<5 Pa | |||
制品保存温度 | 9 | 0°C | 1 | X | 0 | |
注意事项：
1. 辅料配方发生微量的变化，需重新测定冻干参数，并做相应调整。
2. 冻干设备要求：
冷阱盘管表面温度≤ -60°C
板层温度≤-45°C，温度均一性±1°C
可做压升测试（冻干生产前，做泄漏率测试）
3. 环境要求：
溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行，环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核，影响溶液的结晶的过冷度，导致产品质量不一致性。
4. 真空控制
掺气方式：建议掺入气体为高纯氮气
5. 冻干试剂MIX工艺参数设定参考（冻干设备升华效率≥1 mm/小时）。
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13743ES92 | 10000 T | 13555.00 | |
13743ES98 | 100000 T | 95885.00 |
HB220113
