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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10666ES03 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
10×Capping Buffer GMP-grade | 10666ES03 | 1 mL | 150 |
10666ES10 | 10 mL | 650 |
产品描述
真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟|嘌|呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟|嘌|呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲|硫|氨|酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，并且保证正确的方向。
Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽缓冲液是经过优化后的10×Capping Buffer，按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。
产品性质
pH | 8.0±0.2 |
核酸外切酶（Exonuclease Activity） | 阴性 |
切口酶（Endonuclease Activity） | 阴性 |
RNA酶（RNase Activity） | 阴性 |
无菌检查（Sterility） | 无菌生长 |
【注】：具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告。
运输和保存方法
冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
2. 所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；
3. 在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；
4. 对于已知5'末端结构的RNA，可以延长反应时间至60 min，提高加帽效率；
5. 5'末端标记反应体系中，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。
Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽缓冲液
使用方法
1. 加帽反应（反应体系20 μL）
本步骤适用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反应，且可根据实验需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至15 μL；
2）65℃加热5 min；
3）取出离心管置于冰上5 min；
4）依次加入以下组分：
组分 | 体积 |
上述变性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP（10mM） | 1.0 μL |
SAM（2mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：10×Capping Buffer配方为：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30 min；
6）RNA加帽完成，可进行后续实验。
2. 5'末端标记反应（反应体系20μL）
本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大，其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1）取适量RNA到1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至14 μL；
2）65℃加热5 min；
3）取出离心管置于冰上5 min；
4）依次加入以下组分：
组分 | 体积 |
上述变性的RNA | 14.0 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM（2mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：GTP mix为GTP和少量标记物，其中GTP使用浓度参照注意事项5）。
5）37°C孵育30 min；
6）RNA 5'末端标记完成，可进行后续实验。
HB220316
