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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 8T |
|---|---|---|---|
| 货号 | 12607ES08 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module 快速DNA连接?？?/span> | 12607ES08 | 8T | 1283.00 |
12607ES24 | 24T | 2933.00 | |
12607ES96 | 96T | 9773.00 |
产品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接?？椤１静房稍谒雌侥┒薉NA////片段或双链3′-dA DNA////片段的两端连接Illumina®测序平台适用的DNA接头，具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。本产品已与Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
产品编号 | 组分名称 | 规格 | |
12607ES24 | 12607ES96 | ||
12607-A | Fast-Pace T4 DNA Ligase | 120 μL | 480 μL |
12607-B | 5×Fast-Pace Ligation Buffer | 480 μL | 960×2 μL |
测序验证
本品与Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存，效期一年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途!
使用方法
1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表1.500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩尔比 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 10 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 1 ng | 200:1 |
50 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。
2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，并涡旋混匀几秒钟，瞬离后至于20℃，反应15分钟即可。
表2.Adapter Ligation体系
名称 | 体积（μL） |
dA-tailed DNA | 60 |
5×Fast-Pace Ligation Buffer | 20* |
Fast-Pace T4 DNA Ligase | 5 |
DNA Adapter | X** |
dd2O | To 100 |
【注】：*对于Ligation Enhancer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**根据自身需求加入适量的接头。
【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？
第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；
Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；
根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；
接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）
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