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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 2000 U |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10612ES84 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
UCF.METMmRNA Cap 2′-O-Methyltransferase GMP-grade UCF.METMmRNA Cap 2氧甲基转移酶GMP级 | 10612ES84 | 2000 U | 985 |
10612ES92 | 10000 U | 4285 | |
10612ES97 | 50000 U | 18585 |
产品描述
mRNA Cap 2氧甲基转移酶（UCF.METM mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5′末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2′-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA，从而形成Cap1结构。Cap1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。
本品是按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的Cap1加帽反应。
产品性质
英文名（English Name） | UCF.METM mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase |
来源（Source） | 重组E.coli |
宿主核酸残留（Host nucleic acid residue） | <10fg/U |
宿主蛋白残留（Host protein residue） | <50ppm |
病原体（HBV/ HCV/HIV）检测 | 无检出 |
内毒素残留（Endotoxin residue） | <0.05EU/1000U |
支原体检测（Mycoplasma detection） | 无检出 |
无菌检测（Sterility testing） | 无检出 |
纯度（Purity） | ≥95%（SDS-PAGE） |
储存缓冲液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1mM EDTA，1mM DTT，100mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100 |
活性单位定义（Unit Definition） | 一单位（U）定义为：在37℃条件下1h内甲基化10pmol的80nt带帽RNA转录物所需的酶量。 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。推荐分装冻存，避免反复冻融。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | ||
10612ES84 | 10612ES92 | 10612ES97 | ||
10612 | mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 40 μl | 200 μl | 1 ml |
使用方法
1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16μl；
2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5min，反应后冰上放置 5min；
3、按下表（1）配置反应体系（适用于10μg以内Capped RNA的甲基化反应）；
4、37℃条件下孵育1h（对与目的片段长度小于200nt RNA，可将孵育时间增加到2h）；
5、10×Capping Buffer的配置如下：500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl2、10mM DTT。
表1：20μL反应体系配置
体系组分 | 20μl（Total） |
Denatured Capped RNA | 16μl |
10x Capping Reaction Buffer | 2μl |
SAM (4 mM) | 1μl |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 1μl |
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子；
3、反应之前推荐65℃加热5min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5′端结构复杂，可将时间延长至10min；
4、SAM试剂在pH 7–8，37°C条件下稳定性较差，需要现用现配?？稍は燃扑愫盟鑃AM的用量，在反应前将32 mM的储备液稀释成4 mM的工作液。为防止SAM降解，工作液应保存于冰上。
