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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 货号 | 10730ES01 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 生物产业 |
产品介绍
Hieff UNICON HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES01 | 100 μL | 5152.00 |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES03 | 1 mL | 询价 |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES25 | 25 mL | 询价 |
产品描述
Hieff UNICON HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗体（货号：30301ES）和Hieff® Taq DNA Polymerase（货号：10101ES）的混合产品。Hieff UNICON® Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在预变性温度下加热30 sec*失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是热稳定重组型DNA聚合酶，具有较高的模板亲和力，非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3′-dA，可轻松克隆T载体。
产品组分
编号 | 组分 | 10730ES01 (100 μL) | 10730ES03 (1 mL) | 10730ES25 (25 mL) |
10730-A | HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 100 μL | 1 mL | 25 mL |
产品应用
低拷贝基因扩增、基因型鉴定
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
DNA聚合酶活性封闭性检测：在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中，65℃孵育30 min，活性释放低于5%。
DNA聚合酶活性释放检测：在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中，95℃加热30 sec，活性释放高于95%。
核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg λ-HindIII，74℃孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74℃孵育1h，DNA电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
PCR反应体系（50 μL）
组分 | 体积 (μL) | 终浓度 |
ddH2O | to 50 | - |
2×Taq Buffer（含Mg2+、dNTP） | 25 | 1× |
模板DNA | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 0.05 | 2.5 U/50 μL |
【注】：1）试剂使用：各组分使用前需充分融化混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用2.5 U/50 μL?？梢栽?.25-5 U/50 μL之间进行优化。
3）Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类 | 模板使用量 |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒DNA | 100 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |
变性 | 95℃ | 10 sec | 35-40 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
【注】：1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
4）扩增程序：本产品用于定量实验，可使用2步法程序扩增，去掉延伸步骤，退火和延伸合为一步，对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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HB200522
