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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10185ES70 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
产品介绍
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
小鼠组织直接pcr试剂盒
10185ES50
50 T
323.00
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
小鼠组织直接pcr试剂盒
10185ES70
200 T
983.00
产品描述小鼠组织直接pcr试剂盒可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）样本进行PCR扩增，具有*的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA。裂解液可以直接加入到PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，5 mg小鼠组织或1-5 mm鼠尾即可进行实验。
本试剂盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix为2倍浓度的热启动PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。
产品组分编号
组分
产品编号/规格
10185ES50（50 T）
10185ES70（200 T）
10185-A
Buffer ML
1 mL×5
20 mL×1
10185-B
Buffer MT
0.6 mL
1.25 mL×2
10185-C
2× Mouse Direct PCR Mix
500 μL
1 mL×2
a)Buffer ML 为裂解缓冲液，包含了强力蛋白变性剂，请戴手套操作。
b)Buffer MT 为终止缓冲液，用以终止Buffer ML的裂解功能。
c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂、稳定剂和电泳指示染料等。
运输方法冰袋运输。
保存方法1. 组分A：2-8℃保存，有效期1年。使长时间多次使用，请分装冻存，避免交叉污染。
2. 组分B/C：-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。
操作方法样品基因组DNA释放
1. 剪取5-10 mg动物组织或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL离心管中；
2. 在上述离心管中加入90 μL Buffer ML，轻轻涡旋使得样品*被裂解液浸润，短暂离心；
3. 在恒温孵育仪中设置95℃孵育15 min；
4. 加入10 μL Buffer MT，轻弹混匀，终止裂解;
5. 选做步骤：12000 rpm离心2 min；
6. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后续PCR扩增。
【注】：组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。
【注】：95℃孵育，一般15 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30 min。组织块不需*裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
PCR反应鉴定——PCR反应体系
组分
体积（μL）
终浓度
2× Mouse Direct PCR Mix
10
1×
Forward Primer (10 μM)
0.5
0.2-0.4 μM
Reverse Primer (10 μM)
0.5
0.2-0.4 μM
裂解产物（DNA模板）
1
-
ddH2O
补足至 20 μL
-
【注】：各组分使用前应充分混匀。
a）模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20 μL体系建议采用1 μL上清液作为模板；
b）引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度；
c）反应体系：推荐使用20 μL，也可根据使用习惯调整体系体积大?。?/span>
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
PCR反应鉴定—PCR反应条件循环步骤
温度
时间
循环数
预变性
94℃
5 min
1
变性
94℃
10 sec
35
退火
60℃
20 sec
延伸
72℃
30 sec/kb
终延伸
72℃
5 min
1
【注】：a）退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。
b）延伸时间：请按30 sec/kb设定。
c）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。
d）电泳上样：取3-5 μL扩增产物上样即可。
对照反应在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
注意事项
1.为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。2. 建议使用新鲜的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！
相关产品产品名称
货号
规格
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒
10184ES50/70
50T/200 T
Animal Tissue PCR Component 动物组织PCR组分
10170ES50/70
50T/200 T
Animal Tissue Lysis Component 动物组织裂解组分
19698ES50/70
50T/200 T
Plant Tissue PCR Kit (With Dye)
10187ES50/70
50T/200 T
常见问题与解决方法常见问题
可能原因
解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。
PCR反应体系或反应条件不合适。
使用梯度PCR摸索PCR佳反应条件。
PCR试剂保存不当失去活性。
2× Mouse Direct PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
引物设计问题。
尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。
使用新鲜的试剂。
加入组织裂解液过量。
增大反应体系，或减少裂解液的用量。
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。
裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
模板加入量不适合。
在反应体系1-10%范围内优化模板加入量。
PCR循环数不足。
增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。
增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
PCR引物错配。
重新设计PCR引物。
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。
PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带
操作工具或试剂污染。
实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
样本间交叉污染。
每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。
HB210824
