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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100UL |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10149ES01 | 应用领域 | 生物产业 |
产品介绍
2×Hieff Canace® 高保真酶预混液信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10149ES01 | 100 μL | 93.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10149ES03 | 1 mL | 553.00 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10149ES08 | 5×1 mL | 1453.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10149ES50 | 50×1ml | 11655.00 |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 | 10149ES60 | 100×1ml | 21655.00 |
2×Hieff Canace® 高保真酶预混液描述
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系。预混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达10 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外，该产品还含有特异?；ぜ?，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品应用
基因克??；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1）解冻后Master Mix可能出现晶体沉淀，使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失，不影响试剂性能。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系（冰上配制）
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板 | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix | 25 μL | 1× |
【注】：
1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类 | 扩增片段1 kb-10 kb |
基因组DNA | 50 ng-200 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
两步法程序（优先推荐）：
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常规程序）：
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 15，每个循环降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
变性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5）不同扩增程序下的特点：
程序类型 | 两步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特异性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR产量 | 中等 | 最高 | 中等 |
检出率 | 高 | 中等 | 高 |
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产品名称 | 货号 | 规格 |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 | 10148ES60/76/80 | 100/500/1000 U |
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