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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 10 U |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10148ES10 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
| 主要用途 | 基因克??；复杂DNA模板扩增；高通量建库 |
产品介绍
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase | 10148ES10 | 10 U | 103.00 |
10148ES60 | 100 U | 683.00 | |
10148ES76 | 500 U | 2383.00 | |
10148ES80 | 1000 U | 4583.00 |
产品描述
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到15 sec/kb，扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编码/规格 | |||
10148ES10 （10U） | 10148ES60 （100U） | 10148ES76 （500U） | 10148ES80 （1000U） | ||
10148-A | Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 250 μL×2 |
10148-B | 2×Canace® Gold PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） | 300 μL | 1 mL×3 | 1 mL×15 | 1 mL×30 |
产品应用
基因克??；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精DNA为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系（冰上配制）
组分 | 体积 | 终浓度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Canace® Gold PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 适量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL?？梢栽?.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类 | 扩增片段1 kb-10 kb |
基因组DNA | 50ng-200 ng |
质?；虿《綝NA | 10pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序
两步法程序（优先推荐）：
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常规程序）：
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
循环步骤 | 循环步骤 | 循环步骤 | 1 |
预变性 | 预变性 | 预变性 | 15，每个循环降低1℃ |
变性 | 变性 | 变性 | |
退火 | 退火 | 退火 | |
延伸 | 延伸 | 延伸 | 20 |
终延伸 | 终延伸 | 终延伸 | |
循环步骤 | 循环步骤 | 循环步骤 | |
预变性 | 预变性 | 预变性 | 1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5）不同扩增程序下的特点：
程序类型 | 两步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特异性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR产量 | 中等 | 最高 | 中等 |
检出率 | 高 | 中等 | 高 |
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