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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100 U |
|---|---|---|---|
| 货号 | 10144ES60 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
| 主要用途 | 使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增 |
产品介绍
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
Hieff Canace® II Uracil DNA Polymerase
10144ES60
100 U
393.00
10144ES76
500 U
1993.00
产品描述Hieff Canace® II Uracil DNA Polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性是Taq DNA Polymerase的52倍，是Pfu DNA Polymerase的6倍，且*克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有*的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分编号
组分
规格
10144ES60（100U）
10144ES76（500U）
10144-A
Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL）
100 μL
500 μL
10144-B
2×Canace® II Uracil PCR buffer(含Mg2+，dNTPs)
1 mL×3
1 mL×15
运输和保存方法冰袋运输。
-20℃保存。有效期一年。
产品应用使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增
使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增
使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增
注意事项1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2) 本产品仅作科研用途！
使用方法Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1. 推荐反应体系所有操作应于冰上进行，2×Canace® II Uracil PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。
表1 PCR扩增反应体系组分
体积
模板或接头连接产物
X µL
2×Canace® II Uracil PCR buffer
25 µL
正向引物 (10-25 μM）
1-2.5 µL
反向引物 (10-25 μM）
1-2.5 µL
Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL）
1 µL
ddH2O
Total to 50 µL
【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）模板：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率；
3）dNTP：推荐dNTP使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTP中不含dUTP，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。
4）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。5）Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨询，要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的buffer。
2．推荐反应程序表2 PCR扩增反应程序
步骤
温度
时间
循环数
预变性
98°C
1 min
1
变性
98°C
10 sec
1~15（根据实验要求）
退火
60°C
30 sec
延伸
72°C
30 sec
终延伸
72°C
5 min
1
Hold
4°C
-
-
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min；
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状；
3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间根据实际需要进行调整；
相关产品
产品名称
产品货号
规格
价格（元）
Hieff Canace® High-Fidelity DNA polymerase
10135ES60/76/80
100/500/1000 U
626/2356/4256
Hieff Canace® II High-Fidelity DNA polymerase
10140ES60/76
100/500 U
653/2453
HB210928
