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供货周期 | 现货 | 货号 | 11119ES60 |
---|---|---|---|
应用领域 | 生物产业 |
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11119ES60 | 100 T | -20℃ | 755.00 |
产品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。
试剂盒中包含由总RNA或mRNA合成第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6和oligo (dT)18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
11119ES60 (100 T) | ||
11119-A | RNase-free H2O | 2×1 mL |
11119-B | 5×Hifair® Ⅱ Buffer | 400 μL |
11119-C | Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 200 μL |
11119-D | Oligo (dT)18 (50 μM) | 100 μL |
11119-E | Random Primers N6 (50 μM) | 100 μL |
【注】:1)5×Hifair® Ⅱ Buffer中包含dNTP。2)Hifair® Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;
2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
第一链cDNA合成操作步骤
1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)
组分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 20 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
5×Hifair® Ⅱ Buffer | 4 μL |
Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL |
or Oligo (dT)18 (50 μM) | or 1 μL |
or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1 μL |
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL |
【可省略】:若后续实验为PCR,针对复杂模板,可将RNA、H2O、反转录引物在65℃孵育5 min 后,迅速冰上冷却,然后再加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix;若后续实验为qPCR,则可省略65℃孵育步骤,直接在体系中加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix。
【注】:* 若后续实验为qPCR,建议Total RNA 或 mRNA投入量不超过1 μg或100 ng,如果目的基因的表达丰度非常低,最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】:
1)荧光定量实验可以只使用Random Primers N6;也可以1:1与Oligo (dT)18混合使用,效果更好。
2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃。
3)逆转录产物可以-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。
关于引物的选择
1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。
2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
3)Random Primers N6适用性较广,mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。
4)使用Random primers N6,进行2 kb以下的cDNA合成时,Random primers N6的使用量为 1-2 μL;2 kb 以上的cDNA合成时,Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。
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