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关键词：脂质体，脂质体转染试剂，Lipo
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent
脂质体核酸转染试剂
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） | *（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂 | 40802ES02 | 0.5ml | 4℃ | 738.00 | 488.00 |
40802ES03 | 1 ml | 4℃ | 1308.00 | 868.00 | |
40802ES08 | 5×1ml | 4℃ | 4878.00 | 3248.00 |
产品 | RMB/ml | RMB/反应* |
Hieff TransTM | 868 | 1.7 |
Lipofectamine? 2000 | 3090-3700 | 6.2-7.4 |
Lipofectamine? 3000 | 3710-4447 | 6.3-8.9 |
FuGene? 6 | 4135 | 8.3 |
*以24孔板为例，每孔2ul转染试剂
产品描述
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其*的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff TransTM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff TransTM以无菌的液体形式提供，浓度为1mg/ml。对于 24 孔板转染，每次用2μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做500 次转染；对于6孔板，每次用10μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做100 次转染；
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品4oC保存，一年有效。不可冷冻！
Hieff Trans转染实例
注意事项
1) Hieff TransTM要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用。
2) Hieff TransTM可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3) 转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4) 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5) 阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6) 初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到zui大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff TransTM比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一）
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化*使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500μl生长培养基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。
1. 按照以下体系配制DNA-Hieff TransTM复合物：
1）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.5μg DNA?；煸?。
2）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释1-2.5μl Hieff TransTM。
Hieff TransTM稀释后室温孵育5min（在30min内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
【注意】：即使使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用DMEM 培养。如果DMEM 作为的稀释液，必须在5min内同稀释的DNA混合。
2. 混合稀释的DNA和稀释的（总体积100μl），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂质体复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h。
3. 直接将100μl DNA-Hieff TransTM复合物加入到细胞培养板每个孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为500μl无血清培养基。
4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24h后，按照1：10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48h后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff TransTM复合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA。对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1μg/ml和50ng/ml，可以提高CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。
转染体系的调整
对于不同的细胞培养板，Hieff TransTM、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表一）。对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低?？旖莸牟街韬偷鞍妆泶锵赴档淖臼沟梅浅Ｊ视糜?/span>96 孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
表一 在不同的培养容器中转染，，核酸，细胞和培养基的用量
Culture vessel | Surf. area per well1 | Shared reagents | DNA transfection | RNAi transfection | |||
Vol. of plating medium | Vol. of dilution medium2 | DNA | RNA | ||||
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 2×25 μl | 0.1 μg | 0.2-0.5 μl | 5 pmol | 0.25 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 2×50 μl | 0.5 μg | 1-2.5 μl | 20 pmol | 1.0 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 μl | 1 μg | 2-4.5 μl | 40 pmol | 2.0 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 μl | 2-4 μg | 5-10 μl | 100 pmol | 5 μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 4-8 μg | 10-20 μl | 200 pmol | 10 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 12-24μg | 30-60 μl | 600 pmol | 30 μl |
1 不同厂商提供的细胞培养板表面积可能有所不同；
2 稀释DNA或RNAi所用的培养基体积。
【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。使用时DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值保持在1:0.5-1:5。
