表1. 普通款和熱敏款蛋白酶K特點(diǎn)比較
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在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，蛋白酶K憑借的蛋白降解性能，始終是核酸提取與樣本裂解等核心實(shí)驗(yàn)步驟的關(guān)鍵工具。其通過(guò)高效裂解細(xì)胞并降解蛋白質(zhì)，為核酸的快速釋放與純化奠定基礎(chǔ)。然而，傳統(tǒng)蛋白酶K在實(shí)際應(yīng)用中暴露出顯著的技術(shù)瓶頸：滅活過(guò)程復(fù)雜且風(fēng)險(xiǎn)高。無(wú)論是采用苯酚/氯仿抽提的多步驟純化流程，還是高溫處理引發(fā)的樣本降解風(fēng)險(xiǎn)，都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)、結(jié)果重現(xiàn)性降低，進(jìn)而影響后續(xù)數(shù)據(jù)分析的準(zhǔn)確性與可靠性。
為突破這一技術(shù)壁壘，翌圣生物成功研發(fā)并推出熱敏蛋白酶K（Thermolabile Proteinase K，Cat#14809）產(chǎn)品，該產(chǎn)品只需在55℃條件下加熱10分鐘即可實(shí)現(xiàn)滅活，無(wú)需額外的核酸純化步驟，有效避免了酶殘留對(duì)下游實(shí)驗(yàn)的干擾。例如：Thermolabile Proteinase K應(yīng)用于直擴(kuò)PCR、DNA&RNA建庫(kù)等實(shí)驗(yàn)中，可省略多次純化流程，有效降低核酸損耗，提升樣本利用率；應(yīng)用于甲基化DNA分析過(guò)程中，通過(guò)精準(zhǔn)控制酶解條件，避免因過(guò)度消化導(dǎo)致的甲基化位點(diǎn)破壞，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Thermolabile Proteinase K
Thermolabile Proteinase K（TLPK）是通過(guò)基因工程技術(shù)改造獲得的重組絲氨酸蛋白酶，保持了與野生型版本相似的活性和特異性，具備廣泛的切割活性，能夠高效水解多種類(lèi)型的肽鍵。在理化性質(zhì)方面，TLPK展現(xiàn)出良好的緩沖液兼容性，可在多種緩沖體系中保持活性。其最適反應(yīng)條件為pH 7.0-9.5、溫度20-40℃，在此區(qū)間內(nèi)能夠發(fā)揮最佳效能。該酶具備優(yōu)異的熱敏感性，只需在55℃條件下溫育10分鐘即可全熱失活。
消化能力強(qiáng)、熱敏感
分別使用翌圣及進(jìn)口品牌Supplier A的TLPK處理限制性?xún)?nèi)切酶PvuII后，使用處理后的PvuII對(duì)λDNA進(jìn)行處理，結(jié)果顯示翌圣TLPK可有效抑制PvuII活性，且55℃條件下溫育10分鐘可使TLPK全熱失活，對(duì)后續(xù)反應(yīng)體系中的添加的蛋白無(wú)影響。
圖1.消化能力與熱敏感性能驗(yàn)證
無(wú)核酸外切酶、切口酶、RNase殘留
將0.12 U TLPK分別與核酸底物孵育，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣的3個(gè)批次TLPK均未檢測(cè)到核酸外切酶、切口酶或RNase殘留，為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供了有力保障。
圖2.核酸外切酶、切口酶、RNase殘留結(jié)果驗(yàn)證
為滿(mǎn)足多樣化實(shí)驗(yàn)需求，翌圣生物精心推出蛋白酶K系列產(chǎn)品，涵蓋普通型與熱敏型兩大品類(lèi)。普通型蛋白酶K適用于常規(guī)蛋白降解場(chǎng)景，而熱敏型產(chǎn)品則憑借快速熱滅活特性，為下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)提供高效解決方案，為科研工作者提供精準(zhǔn)適配的實(shí)驗(yàn)工具選擇。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品特點(diǎn) |
Proteinase K蛋白酶K | 10401ES | 100mg/1g/5 g/100g | 粉末狀，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，配制成目標(biāo)濃度 |
Proteinase K Solution蛋白酶K溶液(20 mg/mL) | 10412ES | 1 mL/10 mL/25 mL/500 mL | 液體，免配制，使用起來(lái)更方便 |
Proteinase K Solution蛋白酶K溶液（低殘留） | 10410ES | 1 mL/5 mL/100 mL/1000 mL | 極低的背景菌殘留，更適合病原微生物核酸提取 |
Thermolabile Proteinase K | 14809ES | 30 U/120 U | 熱敏款，適用于反應(yīng)后需在溫和條件下去除蛋白酶K活性的場(chǎng)景或熱敏感樣本的處理 |
