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如果你常做WB实验，结果不稳定，没有笔直的条带，背景高，你的救星来了！这个美誉度非常高的ECL发光液，我?了3年，强?推荐！别看它只是一瓶小小的试剂，能量却特别大，轻轻一滴，静等3分钟，在印迹膜上你会看到一条笔直的白光缓缓发出，太漂亮了，一天做实验的疲惫感瞬间就消失了。目前市场上的 ECL显色液质量参差不齐，如何去挑选适合自己实验的ECL就显得特别重要，以下几点建议大家反复阅读并收藏。
01
灵敏度
反映的是ECL显色液检出被检物质低量的能力，用户可根据样本中待检指标的量选择合适的检测试剂，在做实验前需要对靶蛋白进行文献调研。不能盲目选择灵敏度过高的产品，例如，针对GAPDH，选择了灵敏度过高的ECL发光液，带来的结果很可能就是显影得到棕色条带。
▲ 图：高灵敏度ECL对GADPH显影的影响
02
信号持久度
指的是加入ECL显色液后，稳定发光的持续时间。稳定持久的发光可实现多次曝光以获得最佳的图像。由于每张胶片只能使用一次，在判断曝光时长是否合适前必须进行显影。为了掌握信号和背景之间的平衡，一般都需要按照不同的时长曝光多次。如果胶片过曝了，信号可能会被背景掩盖。
▲ 图：曝光不同时间对显影的影响
03
抗体稀释度
一抗和二抗的稀释度在说明书中一般都会有建议。稀释度高的话，相对来说，可以减少一抗和二抗的消耗，节约更多的抗体，且可以降低杂蛋白的影响。
▲ 图：二抗不同稀释倍数对显影的影响
04
信噪比
指的是正常目的信号与背景信号的比值，信噪比越高，ECL显色的背景越低，目的条带越清晰。
▲ 图：高信噪比与低信噪比ECL对比
05
兼容性
比如对转印膜、封闭试剂和各种抗体稀释液等的兼容性。例如转印膜有NC膜和PVDF膜，有些灵敏度不是特别高的ECL，会建议选择NC膜。
06
文献引用
产品的文献引用数量和高质量的 SCI 文章的引用是很多用户都关心的问题，这是业界对产品认可的一个非常重要指标，至少其他的科研工作者已经验证过了该产品的质量，出问题的概率会极低，而且对相关用户的科研有一定的借鉴作用。小翌家的ECL发光液收集的SCI文献已经有60篇，且都是高质量期刊。
▲ 图：翌圣ECL化学发光试剂盒文献引用
07
蛋白表达丰度
很多新手会忽视的关键点，对目的蛋白一知半解，实验很容易“翻车"。做实验前首先要了解目的蛋白的细胞定位、表达特异性、分子量、异构体、抗体等？靶蛋白的表达量是否在ECL发光液的检测范围内？
很多蛋白的表达是有组织特异性的，例如，最近的热门靶蛋白CLDN 18.2，CLDN 18.2蛋白的表达具有组织特异性，主要在胃和胃腺癌组织中表达。在正常生理状态下，CLDN 18.2仅在胃粘膜上已分化的上皮细胞中表达，而在其它的健康组织中均无表达。还有一些蛋白，例如IL6和TFNA等炎症因子，如果样本未做刺激处理，目的蛋白表达含量很低，WB实验结果中的条带可能会很浅，这种情况下就需要选择高灵敏度的ECL发光液来放大信号。
08
样本量
在Western Blot实验时，由于样品蛋白难以提取，样品量有限，靶标的量在这种情况下可能很低，成像时通?；岢鱿痔醮⑷趸蚣觳獠坏侥勘晏醮?。这会使研究人员需要重复进行实验，这既浪费时间又浪费资源。除了在样本提取，抗体浓度，封闭液等方面需要优化外，发光液ECL也需要选择灵敏度，检测范围更广的发光液，可以让研究者选择更少的样本体积，产生相同的强信号的结果。
09
简便性
底物在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎。这也不妨作为选择ECL发光液的一个指标。
▲ 图:YeasenECL化学发光试剂盒操作步骤
10
经济性
国产试剂因为省去不少物流和报关费用，与国外进口试剂相比价格上有比较大的优惠。有很多客户因为对品牌的信任度问题，还是选择国外进口试剂。但是国产品中找一个美誉度高的品牌，也是一个非常好的选择。通过行业调查公司以及网络，相关宣传资料等可以找到美誉度高的 ECL化学发光液供应商，这个反映的不仅是产品质量的问题，对供应商的售前售后服务也是一个非常严格的检验。
▲ 图:Yeasen ECL超敏型底物Super相对品牌T同级别底物，检测灵敏度更高
有2种型号特别推荐，普适性非常强的Super ECL，它是发光液中的三好学生，灵敏、稳定、性价比高。MaxiSignal型ECL，它像灵敏的过敏原，一点即发，可以触动低飞克级的蛋白，光源长达8个小时，一下就消除了你的焦虑。
一般的实验室或者刚开始做预实验时，其实会配备2个不同灵敏度的发光液。以下这2个ECL基本上可以满足实验者的所有需求了。
选购指南
Yeasen | Enhanced ECL 增强型 | Super ECL 超敏型 | SuperDura 持久型 | MaxiSignal 最高灵敏度型 |
适用样本 | 靶点丰度较高，常规蛋白样本 | 靶点丰度低， 样本有限 | 靶点丰度较低， 样本有限 | 靶点丰度极低， 样品珍贵 |
检测灵敏度 | 中等皮克级 | 低皮克级 | 中等飞克级 | 低飞克级 |
信号持续时间 | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
适用检测系统 | 所有试剂均适用X射线胶片，CCD成像仪 | |||
一抗稀释浓度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10000 | 1:1000-1:50000 | 1:5000-1:100000 |
二抗稀释浓度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10000 | 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
推荐用膜 | NC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
存储稳定性 | 室温1年 | 室温1年 | 室温1年 | 4℃ 1年，室温半年 |
优势 | 同一级别灵敏度中信号* | 适用于多数WB实验 | 最长信号持续时间，极其适用于多次曝光 | 灵敏度，极其适用于痕量蛋白检测 |
