唾液DNA收集保存運(yùn)輸提取試劑盒

唾液DNA收集保存運(yùn)輸提取試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：40319

v 適用范圍：

針對(duì)唾液樣本中的DNA進(jìn)行收集、保存、運(yùn)輸、純化。

替代或者配套Oragene 唾液收集管使用。

v 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1. 細(xì)胞裂解液低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

v 產(chǎn)品介紹：

傳統(tǒng)的人類基因組DNA樣品的采集往往需要抽血采集并提取全血基因組DNA獲得。該方法有幾個(gè)明顯的缺點(diǎn)：需要一定的采血設(shè)備并需要具有醫(yī)務(wù)知識(shí)的人員來(lái)完成；抽血的疼痛造成排斥拒絕采樣；侵入性采集增加了感染的可能性；采集后血液樣品必須低溫運(yùn)輸保存。本試劑盒可提供無(wú)疼痛、非侵入性的方法，患者不用忍受抽血的疼痛和感染的風(fēng)險(xiǎn)就能獲得高質(zhì)量、高數(shù)量的樣品，受測(cè)者排斥性低，嬰兒和老人都能方便取得DNA樣本。收集過(guò)程十分簡(jiǎn)單，受測(cè)者將唾液吐至保存液內(nèi)混勻就完成收集過(guò)程?；靹蚝蟪叵驴蛇\(yùn)輸保存長(zhǎng)達(dá)一年不會(huì)變質(zhì)。能夠節(jié)省運(yùn)送、保存冷藏設(shè)備和電力費(fèi)用。收集的唾液通過(guò)幾個(gè)簡(jiǎn)單步驟便可提取DNA。抽取的DNA產(chǎn)量平均達(dá)110 μg / 2 mL唾液。

v 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 非侵入性采檢方式免除了抽血的疼痛和降低了污染風(fēng)險(xiǎn)，并增加了取檢的便利性，可由受檢者自行取樣。

2. 僅需2ml的唾液樣本，即可取得約110μg的DNA(不同個(gè)體產(chǎn)量差異很大)。

3. 采樣后的檢體可穩(wěn)定地儲(chǔ)存于室溫環(huán)境一年以上。

v 唾液樣品收集步驟：

1. 用清水漱口1～2次，然后吐掉。

2. 漱口后等候至少5分鐘方可采集唾液，期間不要進(jìn)食、飲用各種飲料。

3. 將唾液(不是喉嚨中痰液)吐到5ml 采集管中，直至2ml 刻度位置。(不可將痰液吐到收集管中，若唾液不足，可做口舌運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)分泌。浮在唾液上層的少量泡沫不包括計(jì)算在2ml唾液采集量?jī)?nèi)，采集過(guò)程必須在30分鐘內(nèi)完成)

4. 將等體積2ml保存液全部倒在5ml唾液采集管中，充分顛倒混勻后旋緊蓋子。

v 唾液DNA提取步驟(2ml唾液量舉例，可按比例放大縮小每次提取的唾液量)：

細(xì)胞裂解

1. 將保存液/唾液混合物放置于50°C 水浴中至少1小時(shí)或50°C空氣孵箱至少2小時(shí)。

2. 轉(zhuǎn)移4ml混合物 (2 ml 唾液加2 ml保存液)到一個(gè)15 ml或者50 ml 的離心管。加入1ml裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速渦旋振蕩10秒后室溫放置 10分鐘。

雜質(zhì)沉淀

3. 加入1. 7 ml雜質(zhì)沉淀液到上述裂解混合物中。高速渦旋振蕩25秒，充分混勻雜質(zhì)沉淀液和裂解混合物。

4. 8,000xg離心5分鐘。沉淀的雜質(zhì)和蛋白會(huì)在管底形成一個(gè)致密的沉淀團(tuán)。如果蛋白沉淀不太致密，可以冰上放置5 分鐘，然后重復(fù)步驟4。

DNA 沉淀

5. 仔細(xì)轉(zhuǎn)移上清(含有 DNA)到一個(gè)新的15 ml或者50 ml 的離心管。注意不要觸動(dòng)管底沉淀。加入5ml異丙醇。(唾液DNA含量較低時(shí)，加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些產(chǎn)量)，輕柔顛倒混勻50次（有時(shí)可以看見沉淀）。

6. 2,500xg離心3分鐘，此時(shí)一般可在管底看到白色的DNA沉淀。

7. 倒棄上清，倒置后在吸水紙上輕敲幾下以盡可能吸干。加入5ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀。

8. 2,500 x g離心1分鐘, 仔細(xì)倒去上清(沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了)。

9. 倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘(不要干過(guò)頭，也不要?dú)埩粢掖?。

DNA 溶解水化

10. 加入250μl -400μl DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻。

11. 可以放置在65℃溫育30-60分鐘(不要超過(guò)一小時(shí))，然后在室溫或者4℃放置過(guò)夜來(lái)重新水化DNA，中間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化DNA。

12. DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20°C或者-80°C。

 唾液DNA收集保存運(yùn)輸提取試劑盒 核酸提取