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SYBR Green I（20×）定量PCR用 使用說明
最近更新時(shí)間：2016-4-14
提 供 商：北京諾博萊德科技有限公司資料大小：7.5KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：182次
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規(guī)格：1ml
保存條件：-20度，如果經(jīng)常使用，可放2-8度保存一周。
產(chǎn)品簡介：
SYBR Green I與dsDNA 結(jié)合熒光信號可增強(qiáng)800-1000倍。在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR Green I熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺?/span>DNA雙鏈后，熒光信號增強(qiáng)，而不摻入鏈中的SYBR Green I染料分子熒光不變，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測定。
使用濃度對熒光PCR結(jié)果的影響
SYBR Green I熒光定量PCR的試驗(yàn)成功有很多因素，但是SYBR Green I的使用濃度是非常關(guān)鍵的因素，如果SYBR Green I的濃度過低會(huì)使熒光信號的變化降低。這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出；而在高濃度時(shí)，將會(huì)抑制PCR反應(yīng)。降低PCR反應(yīng)效率。所以一般在使用SYBR Green I時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度。
我們提供的為20×的濃縮液，使用時(shí)可稀釋20-100倍，即使反應(yīng)的終濃度為1×到0.2×之間。
鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對PCR反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí)，鎂離子濃度要比無SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)要高出 0.5 到3mM。