SYBR Green I（20×）

SYBR Green I（20×）定量PCR用

SYBR Green I與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)可增強(qiáng)800—1000倍。在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR Green I熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺?/span>DNA雙鏈后，熒光信號(hào)增強(qiáng)，而不摻入鏈中的SYBR Green I染料分子熒光不變，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測(cè)定。

使用濃度對(duì)熒光PCR結(jié)果的影響

SYBR Green I熒光定量PCR的試驗(yàn)成功有很多因素，但是SYBR Green I的使用濃度是非常關(guān)鍵的因素，如果SYBR Green I的濃度過(guò)低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低。這就意味著低拷貝的樣品可能無(wú)法檢出；而在高濃度時(shí)，將會(huì)抑制PCR反應(yīng)。降低PCR反應(yīng)效率。所以一般在使用SYBR Green I時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度。

我們提供的為20×的濃縮液，使用時(shí)可稀釋20—100倍，即使反應(yīng)的終濃度為1×到0.2×之間。

鎂離子濃度的影響

提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí)，鎂離子濃度要比無(wú)SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)要高出 0.5 到3mM。