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豬丹毒血清學(xué)診斷技術(shù)

2012-10-17  閱讀(1631)

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使用血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)方法檢出率很高,而且快速,介紹如下。

 
    (1)血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)  在3%胰蛋白胨肉膏湯(或肝化湯)中,加人(1;40)一(1:80)的丹毒高免血清,同時(shí)每毫升再加入400leg卡那霉素50/lg慶大霉素及2Stag萬(wàn)古霉素(缺乏抗生素時(shí),可加0.05%疊氦鈉及o.0005%結(jié)晶紫),制成丹毒血清抗生素診斷液(如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內(nèi)可至少保存2個(gè)月)。生前取病豬耳尖血1滴,死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內(nèi),37~C培養(yǎng)14-24h。凡管底出現(xiàn)凝集顆?;驁F(tuán)塊時(shí)即判為陽(yáng)性。
 
    (2)熒光抗體檢查法  用熒光素標(biāo)記的豬丹毒免疫球蛋白制成熒光抗體與病料涂片中的豬丹毒病菌發(fā)生特異性結(jié)合,在熒光顯微鏡下觀察,可見(jiàn)亮綠色菌體,即可判豬丹毒陽(yáng)性,是豬丹毒快速檢疫的方法之一。
 
    (3)Dot-PAA-ELISA方法  肖國(guó)生、曹三杰、文心田等應(yīng)用Dot-PAA-ELISA方法快速檢測(cè)豬丹毒抗體。以豬丹毒CD3004(1a型)和C43-12(2型)菌株為抗原,EDTA滲透法提取的抗原作為膜載抗原,建立了Dot-PAA-ELISA檢測(cè)豬丹毒血清抗體方法,經(jīng)研究確定了Dot-PAA-ELISA的*工作條件。試驗(yàn)制備的診斷膜片特異性強(qiáng),不與豬瘟、豬偽狂犬病、豬肺疫、豬鏈球菌病、豬大腸桿菌病、仔豬副傷寒、豬布氏桿菌病、豬衣原體病的陽(yáng)性血清發(fā)生交叉反應(yīng);靈敏度高,能夠zui低檢出豬血清中含2161X10-9g的豬IgG抗體;膜片保存期長(zhǎng),在室溫可保存4個(gè)月,4℃可保存7個(gè)月其檢測(cè)活性不變。用該方法檢測(cè)了仔豬免疫后抗體變化,并通過(guò)豬丹毒三型混合強(qiáng)毒攻毒試驗(yàn)確定了豬能抗強(qiáng)毒攻擊的抗體臨界保護(hù)值為1:32。對(duì)336份血清進(jìn)行豬丹毒抗體檢測(cè),陽(yáng)性檢出率為96.13%。試驗(yàn)結(jié)果表明,本試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、結(jié)果可存檔、重復(fù)性和穩(wěn)定性好,所用試劑材料均可做到標(biāo)準(zhǔn)化,適合基層檢疫單位和養(yǎng)豬企業(yè)用于豬群免疫監(jiān)測(cè)和豬丹毒流行病學(xué)調(diào)查。
 

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