匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司
IPHASE/匯智和源 PBMC在免疫治療藥物研發(fā)中的應(yīng)用熱點(diǎn)問題解答
檢測(cè)樣品:PBMC 免疫治療 外周血單個(gè)核細(xì)胞 藥物研發(fā) PBMC的應(yīng)用
檢測(cè)項(xiàng)目:PBMC 免疫治療 外周血單個(gè)核細(xì)胞 藥物研發(fā) PBMC的應(yīng)用
方案概述:—熱點(diǎn)問題—第一題 CD4+T細(xì)胞加普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)幾天?經(jīng)多次驗(yàn)證,分選后的CD細(xì)胞在普通培養(yǎng)基中僅能維持24~48小時(shí),且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞活力和狀態(tài)都在不斷的下降。
—熱點(diǎn)問題—
第一題 CD4+T細(xì)胞加普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)幾天?
經(jīng)多次驗(yàn)證,分選后的CD細(xì)胞在普通培養(yǎng)基中僅能維持24~48小時(shí),且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞活力和狀態(tài)都在不斷的下降。
第二題 PBMC可以在體外擴(kuò)增嗎?
PBMC在沒有相關(guān)細(xì)胞因子存在情況下不能擴(kuò)增。由于PBMC是一群混合細(xì)胞,即使添加了細(xì)胞因子也只能是某些亞型細(xì)胞的擴(kuò)增,最終導(dǎo)致PBMC細(xì)胞組成比例發(fā)生改變。
第三題 分選后的細(xì)胞想要培養(yǎng),應(yīng)該選擇什么培養(yǎng)基?普通1640是否可以?
不同亞型免疫細(xì)胞擴(kuò)增需要在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加不同的細(xì)胞因子或細(xì)胞因子組合,基礎(chǔ)培養(yǎng)基可選用1640培養(yǎng)基。為滿足客戶的不同需求,IPHASE正在陸續(xù)推出不同亞型細(xì)胞的擴(kuò)增、分化培養(yǎng)基,敬請(qǐng)期待!
第四題 凍存PBMC,復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例會(huì)改變么?
凍存PBMC復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例是否改變與凍存液的凍存效果有關(guān)。凍存效果好的凍存液細(xì)胞凍存復(fù)蘇后活率高,則細(xì)胞亞群比例不會(huì)發(fā)生顯著改變。IPHASE推出的PBMC凍存液細(xì)胞復(fù)蘇后活率>90%,完-全滿-足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。
第五題 陽選,陰選,適配體分選如何選擇?
若靶抗原與磁珠偶聯(lián)抗體的持續(xù)結(jié)合不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),比如分選細(xì)胞用于RNA或蛋白的提取,則可以考慮陽選試劑盒。反之,則需要選擇陰選或IPHASE的適配體無痕分選試劑盒。IPHASE適配體無痕分選試劑盒分選后純度>95%,且細(xì)胞不帶磁珠和與靶抗原結(jié)合的適配體分子,兼具有陽選試劑盒和陰選試劑盒的優(yōu)點(diǎn)。
第六題 凍存PBMC能用于細(xì)胞分選試驗(yàn)嗎?
IPHASE推出的分選試劑盒均可用于凍存PBMC的細(xì)胞分選。
第七題 我公司最近想開發(fā)PBMC質(zhì)控品,想尋找一款凍存效果較好的凍存液,有推薦嗎?
IPHASE無血清細(xì)胞凍存液適用于您的需求,細(xì)胞復(fù)蘇存活率>90%,得率>85%,復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例不發(fā)生改變。
第八題 通過陽性分選試劑盒得到的細(xì)胞是否可通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)?
通過陽性分選的方法得到的細(xì)胞與磁珠連接,但所使用磁珠為納米磁珠,理論上不影響流式細(xì)胞儀的檢測(cè)。如有疑慮,可嘗試使用培養(yǎng)外加反復(fù)吹吸的方式使得細(xì)胞和磁珠脫離后再進(jìn)行流式檢測(cè)。需注意的是,流式抗體選擇請(qǐng)嚴(yán)格參照產(chǎn)品說明。
第九題 IPHASE的人PBMC進(jìn)行HLA分型鑒定嗎?IPHASE的人PBMC供體庫有多大?
IPHASE的人PBMC均進(jìn)行了HLA分型鑒定。IPHASE的人PBMC供體庫目前有近百個(gè)donor,庫容量正在逐漸增加,客戶可以從我們?nèi)薖BMC供體庫中選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的PBMC。
第十題 凍存PBMC復(fù)蘇操作上應(yīng)注意哪些細(xì)節(jié)?
首先,需要37℃預(yù)熱復(fù)蘇培養(yǎng)基。其次,水浴解凍細(xì)胞時(shí)要注意管內(nèi)細(xì)胞融化狀態(tài),當(dāng)融化至少量冰晶時(shí)終止水浴。最后,離心力、離心時(shí)間需按隨貨說明書建議進(jìn)行參數(shù)設(shè)置。
十一題 IPHASE人CD3/CD28+T細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒刺激細(xì)胞擴(kuò)增最長(zhǎng)時(shí)間是多少?
IPHASE人CD3/CD28+T細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒刺激細(xì)胞擴(kuò)增我們只驗(yàn)證到15天,擴(kuò)增效率超千倍,此時(shí)細(xì)胞仍保持良好狀態(tài),完-全可以進(jìn)一步延長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
十二題 IPHASE提供的凍存人PBMC細(xì)胞有哪些規(guī)格?
IPHASE可提供凍存、新鮮兩種狀態(tài)的細(xì)胞,且包含5million/支,10 million/支,50 million/支等多種規(guī)格。
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