Bottom-Up 蛋白質(zhì)組學(xué)原理檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)（Bottom-Up Proteomics）是目前zuì常用的dànbáizhì組學(xué)研究策略之一，其基本原理是通過將dànbáizhì樣本酶解為肽段，然后利用質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）技術(shù)對這些肽段進(jìn)行分析，從而推斷原始dànbáizhì的種類與特征。Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)的核心思想是：先將復(fù)雜的dànbáizhì混合物酶解成較小的肽段，再通過質(zhì)譜對肽段進(jìn)行鑒定和定量，進(jìn)而推斷出原始dànbáizhì的身份和特征。

一、Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)原理

Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)（也稱為 shotgun proteomics）是一種“先肽后蛋白”的研究策略，即先將dànbáizhì樣本酶切為肽段，再通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）對肽段進(jìn)行分析，zuì終通過生物信息學(xué)方法反推出原始蛋白的種類和相對豐度。這一策略與 Top-Down dànbáizhì組學(xué)形成對比，后者直接分析完整蛋白。由于樣本處理靈活、數(shù)據(jù)處理成熟，Bottom-Up 方法已成為主流的dànbáizhì組學(xué)技術(shù)。

二、Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)工作流程

1、樣本前處理

dànbáizhì組分析通常從細(xì)胞、組織或體液等復(fù)雜生物樣本中提取總dànbáizhì。此階段包括裂解、蛋白定量、去除脂類或核酸雜質(zhì)等步驟。樣本質(zhì)量直接決定下游數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性。

2、蛋白酶解

將總dànbáizhì使用yídànbáiméi等特異性蛋白酶進(jìn)行酶切，生成可被質(zhì)譜儀檢測的肽段。yídànbáiméi特異性切割賴氨酸（K）和jīngānsuān（R）殘基之后，有助于產(chǎn)生帶正電荷的短肽，提高質(zhì)譜離子化效率。

3、肽段分離

酶解后的復(fù)雜肽混合物通過高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行分離。反相色譜（RP-LC）利用肽段的疏水性差異進(jìn)行洗脫，是目前zuì常用的分離手段。分離越充分，質(zhì)譜分析的信號越清晰，數(shù)據(jù)解析更準(zhǔn)確。

4、質(zhì)譜分析（LC-MS/MS）

分離后的肽段被送入質(zhì)譜儀中，進(jìn)行一級質(zhì)量掃描（MS1）后，選取特定離子進(jìn)行碎裂（二級質(zhì)譜，MS2）。通過測定肽段及其碎片離子的質(zhì)荷比（m/z），可推測肽段序列，并進(jìn)一步推斷其來源蛋白。

5、數(shù)據(jù)分析與蛋白鑒定

質(zhì)譜數(shù)據(jù)需借助zhuānyè軟件進(jìn)行解析。常用工具如 Mascot、MaxQuant、Proteome Discoverer 等，通過與數(shù)據(jù)庫比對，實現(xiàn)肽段和蛋白的鑒定。進(jìn)一步結(jié)合定量策略（label-free、TMT、iTRAQ、DIA）進(jìn)行差異蛋白篩選，提供生物學(xué)解釋。

三、Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)的技術(shù)優(yōu)勢

1、通量高：可同時分析數(shù)千種蛋白，適用于大規(guī)模研究。

2、樣本兼容性廣：幾乎可適用于所有類型的生物樣本，包括 FFPE 組織、血漿、細(xì)胞等。

3、靈敏度強(qiáng)：先進(jìn)質(zhì)譜儀可檢測到亞皮摩爾級別的低豐度蛋白。

4、技術(shù)成熟：有豐富的文獻(xiàn)基礎(chǔ)與標(biāo)準(zhǔn)流程，支持可重復(fù)性研究。

5、定量jīngquè：配合多種標(biāo)簽或無標(biāo)簽定量方法，可實現(xiàn)不同條件組間的精密比較。

四、Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)面臨的挑戰(zhàn)

盡管 Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但仍面臨一些挑戰(zhàn)：

1、蛋白覆蓋率限制：部分蛋白因結(jié)構(gòu)復(fù)雜或富含疏水區(qū)域，其肽段難以檢測。

2、蛋白翻譯后修飾（PTMs）識別困難：需特定富集策略（如磷酸化、乙?；患┨嵘龣z測率。

3、肽段歸屬問題：同源蛋白或剪接變體可能共享肽段，造成蛋白鑒定歧義。

五、Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)已在多種研究領(lǐng)域中的關(guān)鍵作用

1、腫瘤研究：分析腫瘤組織中差異蛋白，尋找潛在生物標(biāo)志物

2、藥效機(jī)制研究：揭示藥物對蛋白表達(dá)和信號通路的調(diào)控作用

3、疫苗與抗體開發(fā)：分析抗原表位與免疫相關(guān)蛋白表達(dá)

4、微生物組學(xué)與代謝研究：研究微生物對宿主蛋白表達(dá)的影響

在 Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)領(lǐng)域，百泰派克生物科技構(gòu)建了完整的技術(shù)平臺：配備高分辨率質(zhì)譜系統(tǒng)，提供多種定量策略，支持 PTM 富集、亞細(xì)胞組分分析等深度研究，實驗方案靈活定制，滿足從基礎(chǔ)研究到臨床轉(zhuǎn)化的多層次需求，通過優(yōu)化酶切條件、采用多酶組合策略、引入串聯(lián)色譜技術(shù)及多維度質(zhì)譜分析流程，顯著提高蛋白覆蓋率和鑒定準(zhǔn)確性。

Bottom-Up dànbáizhì組學(xué)作為生命科學(xué)研究的重要支柱，憑借其高通量、可擴(kuò)展、數(shù)據(jù)豐富的優(yōu)勢，在科研與產(chǎn)業(yè)中持續(xù)拓展應(yīng)用邊界。百泰派克生物科技將繼續(xù)致力于推動質(zhì)譜技術(shù)在dànbáizhì組學(xué)領(lǐng)域的落地與創(chuàng)新，助力廣大科研工作者探索更深層次的生命奧秘。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

Bottom-Up 蛋白質(zhì)組學(xué)原理檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹