体外受精实验
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- 公司名称 上海达为科生物科技有限公司
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- 更新时间 2025/7/17 10:33:04
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一、定义与技术原理
动物体外受精（IVF） 指在人工模拟的体内环境中，使哺乳动物的精子和卵子完成受精过程的技术。受精后形成的胚胎可移植至受体子宫发育，所得后代称“试管动物”（test-tube animal）。
核心生物学原理：
精子获能（Capacitation）：
精子需去除表面“去能因子”（如糖蛋白），通过添加肝素、钙离子或血清白蛋白诱导获能，增强运动能力与穿透卵子能力。
获能过程依赖物种特异性条件（小鼠需30分钟，猪需2–3小时）。
卵母细胞成熟（Oocyte Maturation）：
体内成熟卵子可直接使用；未成熟卵子需体外培养至MII期（第二次减数分裂中期）。
受精兼容性：人工环境需模拟输卵管生理条件（温度、pH、渗透压、营养）以支持精卵结合。
二、标准化操作流程
1. 卵母细胞采集与处理
| 方法 | 适用场景 | 操作要点 |
|---|---|---|
| 超数排卵法 | 实验动物（小鼠、大鼠） | 注射FSH/LH激素诱导多排卵，从输卵管采集成熟卵子 |
| 活体卵巢穿刺法 | 小牲畜（牛、羊）临床操作 | 超声或腹qiang镜引导采集活体卵巢卵子 |
| 宰杀后卵巢采集法 | 屠宰场资源利用 | 取新鲜卵巢分离未成熟卵子，体外培养成熟 |
2. 精子采集与获能
采集：附睾穿刺或精液收集。
获能处理：
化学法：添加肝素（牛）、钙离子载体（小鼠）。
生物法：与含卵丘细胞的卵泡液共培养。
3. 体外受精
| 技术 | 原理 | 应用场景 |
|---|---|---|
| 共培养法 | 精卵在培养液中自然结合 | 常规IVF（牛、小鼠） |
| 显微注射法（ICSI） | 直接注入单个精子至卵胞质 | 低活力精子或基因编辑动物 |
4. 胚胎培养与评估
培养基：KSOM+AA（小鼠）、SOF（牛）、TALP系列（跨物种）。
发育监测：形态学分级。
5. 胚胎移植或冷冻
移植：同步受体发情周期，手术/非手术法植入子宫。
冷冻保存：液氮（-196℃）长期储存遗传资源。
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