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　　微孔板/酶標(biāo)板使用全指南

　　一、基本結(jié)構(gòu)與分類

　　微孔板(酶標(biāo)板)通常由多個(gè)微孔組成，用于容納待測(cè)樣品、控制品和標(biāo)準(zhǔn)品等。根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，酶標(biāo)板有以下幾種類型：

　　1. 按孔數(shù)分類

　　96孔板?：常用規(guī)格，兼容大多數(shù)酶標(biāo)儀

　　48孔板?：適合小規(guī)模實(shí)驗(yàn)

　　384孔板?：用于高通量篩選

　　2. 按底部形狀分類

　　平底?：折射率低，適合酶標(biāo)儀檢測(cè)

　　U型底?：方便加樣、吸樣、混勻操作，可直接目測(cè)觀察

　　V型底?：適合精確吸取樣品

　　3. 按結(jié)合能力分類

　　高結(jié)合力?：蛋白結(jié)合能力300-400ng IgG/cm2，適合低濃度抗原/抗體

　　中結(jié)合力?：蛋白結(jié)合能力200-300ng IgG/cm2，適合大分子蛋白

　　氨基化?：特殊表面處理，適用于特定實(shí)驗(yàn)需求

　　4. 按顏色分類

　　透明?：用于常規(guī)酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)

　　黑色?：抑制背景熒光，提高熒光檢測(cè)靈敏度

　　白色?：適用于弱光化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

　　二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程

　　1. 準(zhǔn)備工作

　　將儀器置于平穩(wěn)臺(tái)面，接通電源并預(yù)熱30分鐘

　　檢查酶標(biāo)板完整性，確保無(wú)破損、無(wú)污染

　　準(zhǔn)備待測(cè)樣品，根據(jù)需求進(jìn)行稀釋、調(diào)節(jié)pH等工作

　　2. 加樣操作

　　使用加液器準(zhǔn)確加樣，加液頭不能混用

　　每個(gè)孔的加樣量應(yīng)保持一致，避免誤差

　　加入陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各3孔和1孔

　　3. 孵育階段

　　搖動(dòng)反應(yīng)板使樣品充分混合

　　置于37℃培養(yǎng)箱或水浴中20分鐘

　　嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間，確保實(shí)驗(yàn)條件一致

　　4. 洗滌步驟

　　用蒸餾水稀釋洗滌液(15ml→300ml)

　　手工洗滌時(shí)倒出孔中內(nèi)容物，充滿洗滌液靜置30秒，重復(fù)5次

　　機(jī)洗需要執(zhí)行5次，每孔注入200μl洗滌液

　　5. 酶標(biāo)工作液添加

　　向每個(gè)孔添加100μl酶標(biāo)工作液

　　37℃反應(yīng)20分鐘后再次洗板5次

　　6. 顯色與終止

　　加入50μl底物，37℃避光顯色10分鐘

　　加入終止液終止反應(yīng)

　　操作應(yīng)迅速準(zhǔn)確，避免影響結(jié)果

　　7. 讀數(shù)分析

　　使用酶標(biāo)儀讀取吸光度值

　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求處理和分析數(shù)據(jù)

　　記錄實(shí)驗(yàn)條件、操作過程和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

　　三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　1. 材質(zhì)與化學(xué)兼容性

　　聚苯乙烯(PS)材質(zhì)不耐有機(jī)溶劑和強(qiáng)酸強(qiáng)堿

　　避免紫外線照射導(dǎo)致變色

　　聚丙烯(PP)材質(zhì)更耐化學(xué)腐蝕

　　2. 無(wú)菌操作要求

　　使用應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行

　　使用前后需仔細(xì)消毒和清潔

　　某些微孔板需確認(rèn)是否可高溫滅菌

　　3. 操作規(guī)范

　　避免直接觸碰反應(yīng)孔

　　保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔

　　酶標(biāo)板避免強(qiáng)烈物理沖擊和振動(dòng)

　　4. 設(shè)備維護(hù)

　　定期對(duì)酶標(biāo)板進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證

　　保持干燥清潔，避免潮濕和灰塵

　　使用后及時(shí)清潔儀器表面和內(nèi)部組件

　　四、特殊應(yīng)用技巧

　　1. 熒光檢測(cè)

　　黑色酶標(biāo)板可抑制孔間熒光交叉干擾

　　孔間平整性需控制在±5µm以內(nèi)

　　適用于細(xì)胞因子分泌檢測(cè)等應(yīng)用

　　2. 化學(xué)發(fā)光

　　白色酶標(biāo)板可增強(qiáng)弱光信號(hào)

　　需配合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)模式

　　注意背景值控制

　　3. 可拆卸板使用

　　便于清洗、存儲(chǔ)和重復(fù)使用

　　可靈活調(diào)整使用孔數(shù)

　　兼容大多數(shù)酶標(biāo)儀和洗板機(jī)

　　通過規(guī)范操作和合理選型，微孔板/酶標(biāo)板可滿足從常規(guī)ELISA到高通量篩選的各類實(shí)驗(yàn)需求，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

　　注：以上資料僅供參考，完整操作請(qǐng)以實(shí)說(shuō)明為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?。

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