iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

同位素標(biāo)記相對(duì)和juéduì定量（Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation，iTRAQ）技術(shù)是由美國(guó)AB Sciex公司研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4種或8種同位素的標(biāo)簽，通過(guò)特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)，而后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，可同時(shí)比較4種或8種不同樣品中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量或juéduì含量。

iTRAQ試劑由報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和肽反應(yīng)基團(tuán)三部分組成，形成4種或8種相對(duì)分子質(zhì)量均等量（145或305）的異位標(biāo)簽。

• 報(bào)告基團(tuán)：指示蛋白樣品豐度水平。4-plex標(biāo)簽的報(bào)告基團(tuán)質(zhì)量分別為114 Da、115 Da、116 Da和117 Da。

• 平衡基團(tuán)：平衡報(bào)告基團(tuán)的質(zhì)量差，使等重標(biāo)簽重量一致，保證標(biāo)記的同一肽段m/z相同。4-plex標(biāo)簽的平衡基團(tuán)質(zhì)量分別為31 Da、30 Da、29 Da和28 Da，這使4個(gè)iTRAQ標(biāo)簽的等重標(biāo)簽的總質(zhì)量均等于145 Da。

• 肽反應(yīng)基團(tuán)：能與賴氨酸側(cè)鏈或肽段的N端發(fā)生置換反應(yīng)，完成對(duì)肽段的標(biāo)記。

圖1 iTRAQ標(biāo)簽結(jié)構(gòu)（4標(biāo)）

iTRAQ技術(shù)定量分析蛋白質(zhì)組學(xué)的一般流程：

1、蛋白質(zhì)酶解：將蛋白樣品酶解消化成多肽片段。

2、iTRAQ標(biāo)記：使用等量不同的iTRAQ標(biāo)簽標(biāo)記不同多肽樣品。

3、樣品混合：將不同組的標(biāo)記肽段等量混合在一起，然后進(jìn)行真空冷凍干燥，以去除多余的溶劑和試劑。

4、LC-MS/MS質(zhì)譜檢測(cè)及分析：使用質(zhì)譜儀對(duì)混合后的標(biāo)記肽段進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析。在質(zhì)譜儀中，肽段會(huì)被碎裂成更小的片段，并產(chǎn)生不同質(zhì)量的離子。這些離子的強(qiáng)度差異代表了不同肽段的相對(duì)豐度。

5、數(shù)據(jù)分析：通過(guò)軟件對(duì)質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。不同樣品來(lái)源的同一肽段在iTRAQ標(biāo)記后，分子量wánquán相同，因此在一級(jí)質(zhì)譜圖中呈現(xiàn)為一個(gè)峰。在二級(jí)碎裂后，報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂，產(chǎn)生具有特定質(zhì)量的報(bào)告離子。通過(guò)比較這些報(bào)告離子的峰高和面積，可以定量分析不同樣品間相同肽段的表達(dá)量。

圖2 iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)流程

iTRAQ除標(biāo)記樣本數(shù)量與TMT有差別外，其他方面（原理和應(yīng)用）都大致相同。兩者均具備高通量和高準(zhǔn)確性的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于定量分析和大規(guī)模的蛋白質(zhì)組比較研究。百泰派克生物科技BTP采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供基于體外的iTRAQ/TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù)，此外還有體內(nèi)標(biāo)記的SILAC技術(shù)，適用于不同的樣本和場(chǎng)景，可滿足您不同的需求，歡迎咨詢。

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