而在间接ELISA试剂盒法测定中

    ELISA试剂盒操作时洗涤*,不经封闭也可得到满意的结果.,封闭一般是*的.常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉,AbMART推荐使用5%脱脂奶粉,价廉而且封闭能力强,不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用,不宜长期保存,所以ELISA试剂盒中较少使用.

1.包被抗原的选择 
包被抗原可分为天然蛋白、ELISA试剂盒重组蛋白和小分子抗原三大类.天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固相化).经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关ELISA试剂盒蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上. 
2.包被液的选择 
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液. 
3.包被温度的选择 
通常是4-8度条件下夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持. 
4.包被浓度的选择 
包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的ELISA试剂盒zui适包被浓度需要通过实验来确定. 
包板后需要封闭吗？应该选择什么样的封闭体系？ 
ELISA试剂盒封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件.一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,