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二氧化碳培養(yǎng)箱避免污染分析

來源:上海博翎儀器設備有限公司   2013年04月19日 08:53  

        二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環(huán)境如穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養(yǎng)的一種裝置。 廣泛應用于細胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領域。   

    在生物活體內,生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護細胞或組織,但是在體外培養(yǎng)時,沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2和濕度,大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實驗的需要。然而,針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源,各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同,因此細胞體外培養(yǎng)中zui大的威脅實際上是污染問題。   
     二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源:細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。   
     對于細胞來說,非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存,培養(yǎng)箱本身是不會辨別的,而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內,因此箱體內能否抑菌或滅菌非常關鍵!   
    細菌:細菌污染后,培養(yǎng)基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,應迅速將受污染細胞與其它培養(yǎng)細胞隔離,滅菌后丟棄,還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺。   
    病毒:由于病毒寄生生存,爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,相對來說容易處理,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。  
    真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法,包括現(xiàn)在常用的兩性霉素,一旦污染,容易反復爆發(fā),尤其孢子很難殺滅。   
     支原體:支原體污染后,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,抑制細胞生長等,往往被大多數(shù)實驗者忽視。   
    非同種細胞:即細胞交叉污染,由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。  
    因此,以上污染一旦發(fā)生,細胞zui后基本只能丟棄,實驗無法挽救,對于許多取樣困難的實驗損失無法估量!
  

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