乙酰辅酶A/乙酰辅酶A钠盐/Acetyl CoA |
葡萄糖氧化酶/GOX/GOD/Glucose oxidase |
D-α-氨基氧化酶/D-氨基酸氧化酶/D-AAO |
L-氨基酸氧化酶/L-AAO/TM-LAO/L-amino acid oxidase |
己糖激酶/己糖磷酸激酶/HK/Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae |
胃蛋白酶(猪胃粘膜)/胃液素/胃朊酶/蛋白酵素/酸腈酶/百布圣/Pepsin(porcine stomach mucose) |
胰酶粉/胰酵素/胰醇素/胰液素/Pancreatin |
胰蛋白酶(牛胰)/Trypsin(bovine pancreas) |
胰蛋白酶(猪胰)/Trypsin(porcine pancreas) |
脂肪酶(猪胰)/脂酶/脂肪水解酶/脂肪分解酵素/三?;视王;饷?/font>/PPL/Lipase(pocine pancreas) |
过氧化氢酶(牛肝)/氯化酵素/CAT/Catalase(bovine liver) |
溶菌酶(蛋清)/脆壁质酶/球蛋白G/N-乙酞胞壁质聚糖水解酶/Lysozyme(Chinken egg) |
溶葡球菌酶/溶葡萄球菌酶/Lysostaphin |
氯化溶菌酶/溶菌酶氯化物/Lysozyme chloride |
纤维素酶(绿色木霉)/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase(Trichoderma Vride G) |
纤维素酶R-10/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase Onozuke R-10 |
半纤维素酶/Hemicellulase |
PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌,邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成,色素分子量愈高,颜色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用马铃薯为主要材料,通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。
通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。
操作步骤
1:粗酶提取:
水果肉组织按1:1(W/V)比例与003M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,匀浆4层后纱布过滤,滤液以6000rpm离心10min,弃除沉淀获得酶提取液。
2:盐析分级沉淀:
在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),然后6000rpm离心20min弃除沉淀;离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度(边加边搅拌达到充分溶解),再以6000rpm离心20min,弃除上清夜,收集粗酶沉淀。
四、实验结果
获得PPO粗酶液。
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